求助：请问这个如此肥大的是神马细胞？谢谢！

hxf_86

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图片中是我养的牙髓细胞。P0代的时候是梭形的，但是传代以后就越长越大，如图所示（我指图中最大的那几个细胞），然后随着传代，细胞越来越大，感觉整个铺在皿底向外延伸一样。我试过dish和flask，都是这样。消化是用0.25%胰蛋白酶-EDTA，2min。& a. D! ~; H0 A: x
是我消化的问题么？
1 ?( N& M/ ^8 B" d6 q* ^1 x谢谢各位大侠

chengde266

应该是老化，消化时间过长导致。
: I* z0 p8 O/ A' V) G; Q单纯的0.25%胰蛋白酶可以消化2-3min，如果用0.25%胰蛋白酶-EDTA，应该不到1min就可以了。% |/ |# P" S) ~9 e0 {7 X7 A) h
我们实验基本上是用0.25%胰蛋白酶，做过两次0.25%胰蛋白酶-EDTA，30s左右就可以了，你可以试试。

仁心-妙术

我养的是脐血间充质干细胞原代也出现过这种体积巨大的细胞，这些细胞呈近似多边形，胞质内见纵行排列的纹理，细胞可以相互融合。传代可以恢复原来的梭型，感觉不像老化，老化的细胞形态不规则，边界不清，增殖能力消失。

hxf_86

chengde266 发表于 2011-8-18 16:41 ) Q5 @! B0 {! ]2 l  H9 Q
应该是老化，消化时间过长导致。, t/ W7 _: Y# F2 P# H
单纯的0.25%胰蛋白酶可以消化2-3min，如果用0.25%胰蛋白酶-EDTA，应该不到 ...

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首先感谢您的帮助。9 u5 |% V, G2 W6 d0 b
我曾经试过缩短消化时间，30s，60s，90s，但是我的细胞贴壁非常牢，我吹打很久都没吹打下来（我曾经试过吹打收集中和悬液，再次加入新鲜培养基重新吹打，镜下观察还是有不少的贴壁细胞，对此我很郁闷）。- E; t, {# v- ~. i. h7 n4 a% v5 M6 s
如果是消化时间太长的话，我缩短了消化时间，还有什么办法可以把细胞弄下来？谢谢！

hxf_86

仁心-妙术 发表于 2011-8-18 18:01
, a( L5 G) U, N  [1 J: G' e% _我养的是脐血间充质干细胞原代也出现过这种体积巨大的细胞，这些细胞呈近似多边形，胞质内见纵行排列的纹理 ...

5 c; {4 }! n4 W+ `& k% u: t
首先非常感谢您的帮助。) t% ~1 D3 I3 p
我的情况跟你非常像“这些细胞呈近似多边形，胞质内见纵行排列的纹理，细胞可以相互融合。传代可以恢复原来的梭型”$ r4 y: K' z8 h5 k
我的细胞也是这样的，只是有的时候传代可以恢复，但是有的时候就恢复不了。
+ X: |: V- z: M9 a请问您觉得这是什么细胞呢？我也是养得间充质干细胞原代的

仁心-妙术

就是MSCs可能在分化的初期形态还不稳定，原代MSCs影响因素众多接种密度、血清浓度、PH值、细胞因子的种类及添加量、滋养层细胞等，很难找出确切原因。国内外文献均为对其进行描述，如果是其他种类的细胞不会传代后表达MSCs表面抗原。

仁心-妙术

我们细胞的共同特征：原代贴壁的贴壁细胞数目少，养分相对充足，这可能是主要原因。

1301918986

这种细胞是老化了，我们养的MSC老化就是这样，细胞包体逐渐扁平宽大，细胞内出现应力纤维，一旦细胞出现这种情况几代之后细胞就会不增值了。但是是什么原因我也不清楚，有时候细胞在一二代酒出现这种情况，也很苦恼啊。

oucflora

图中的这个细胞，贴壁面积明显的大于其他细胞，细胞贴附面积增加，贴附能力增加，与基底层建立的细胞连接增多了，其分裂增殖能力可能就会下降。5 o$ E$ i  z9 T, [' p$ v- l
原代培养过程中能在体外存活的细胞，有些不具备增殖能力，有些可能增殖几代之后就停止了，这很正常，因为正常体细胞是有分裂次数限制的。

hxf_86

仁心-妙术 发表于 2011-8-19 10:02
0 R; T% Q2 U9 j/ N8 B7 `+ d5 @9 w我们细胞的共同特征：原代贴壁的贴壁细胞数目少，养分相对充足，这可能是主要原因。

# Y6 d* R) u1 Z! k" |" ?& C$ y
我的原代组织块就很少，可能细胞数目少是个很重要的原因。( I  V+ w, u" \0 I: s
如果说养分充足，是否降低血清浓度可以解决？/ n' m- @: |+ y
谢谢