羊水干细胞贴壁问题

OBGYNob

之前养羊水干细胞时因培养箱卫生条件好，培养基没有加入抗生素，细胞生长很好；但是因改为实验中心培养，公用培养箱卫生条件极差，结果生长良好的细胞一夜之间全被污染了...后面因吸取教训后就在羊水培养基加入双抗，但是现在细胞贴壁非常慢，台盼蓝一看镜下80%是死细胞，这究竟是什么原因啊？各位高手救命啊....

deron

胎盘蓝是染色排除法，检验的是细胞膜的完整度。80%的细胞膜不完整，肯定是很大的问题了

OBGYNob

楼上的高手，我也知道肯定不对了啦，但是不晓得问题在哪里嘛...

fguw

理论上双抗应该不影响细胞培养 ，所以---，你们是买的双抗还是自己配的，是细胞培养用的吗？

OBGYNob

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呃....自己配的，过滤分装后-20℃保存

fguw

双抗应该很便宜，如果经费比较宽裕，还是买！自己配，需要说明的是PH是不是需要调？我没有配过，所以不很清楚, t" Z. Q- Z" l- Q6 y: U, Q: `8 \
细胞培养其他试剂更贵，特别是血清，所以别省小钱，

OBGYNob

看来是还很少有人做羊水干细胞的实验了...细胞依然不贴壁，不知道究竟哪里出错了...重新配了培养基，查文献后使用分层液富集，依旧如此....

dragon513

培养每件差可能不只是反应在细菌污染上，如果细胞没有出现污染还要考虑其它方面。如培养箱是不是用了很久，温度、CO2需要校正或者感应不灵敏，波动很大等。

OBGYNob

回复 dragon513 的帖子. |( k# Z* j$ ~1 z9 |4 U
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如果真的培养箱的问题，那就真的完蛋了...我们实验中心的培养箱就没有一个是保持在37℃、5%CO2的，你开一下我开一下，永远都打不到要求了

lemma710

也许是你的双抗配的不对，还是买公司现成的吧，也不是说很贵，细胞都养不好的话后面的实验很难进行下去了。