与个体基因型致敏DC共培养可增强CIK对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性

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( A# P! D4 U$ U4 z0 Z4 K, }, X说明：原文来自haematologica，干细胞之家新闻小组成员deron翻译（转帖请注明）' R" K1 B9 |! y

: ^( `/ B! a3 y6 F$ L+ d翻译内容：! }% V* i2 x' a- G' i( ~5 Q
很多学者报道多发性骨髓瘤（MM）特异性抗原致敏的树突状细胞（DC）在体内外应用的研究，这种DC细胞用以对MM进行免疫治疗。数据显示包括T细胞在内，整个固有免疫系统均对MM有毒性反应。这里，我们检测了细胞因子诱导杀伤性（CIK）细胞对骨髓瘤细胞的细胞毒作用。这种多克隆效应群体包含T细胞、NK细胞和NKT细胞。5 C- d' ^, C+ F& U8 X4 X
设计和方法1 N4 R& c  g  D8 L+ k9 @
从MM病人白细胞层或血液中培养出的CIK细胞，与自体基因型致敏的DC细胞共培养。乳酸脱氢酶释放试验检测细胞毒作用。
6 F/ z' D2 \8 R- N/ B6 _结果6 `" J# i- A) \9 P
CIK细胞能够以低的效应/靶细胞比率溶解MM细胞。在与特异性致敏DC细胞共培养后，上述效应明显增强（83.8%的溶解率，效应/靶细胞比为16：1）。用干扰素γ分泌型磁珠分选后，CIK细胞以较低的效应/靶细胞比（5：1）达到最高的细胞毒作用。在完全自体环境中富集一位MM患者的CD138+细胞后，CIK细胞也呈现出高细胞杀伤活性（54.4%溶解率，效应/靶细胞比为6：1）。有趣的是，(CIK)没有针对骨髓CD138-片段的细胞杀伤活性。* |$ E4 F; |* r0 b; [
说明和结论8 [3 k. f+ B  k
用效应细胞的混杂群体组分，我们能够激活固有和适应性免疫系统对抗骨髓瘤细胞。CIK细胞对MM细胞表现出高溶解活性，且这种活性在（CIK）与抗原特异性致敏DC细胞共培养后，能够得到加强。/ u0 _2 }. r0 X) F- r* ^' x! I4 O

* {1 N- Q2 }: f7 e" Z7 y原文：   

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关于DC&CIK培养的protocol，这篇也算是很经典的了( [9 k) w4 @0 O0 Q  t4 ?9 B

) v! W& v) Y# WDC培养
( X1 T! J4 m8 |& f6 U3 @* L+ r用ficoll密度梯度离心法，从健康供者或从MM患者血液中分离出外周血淋巴细胞。血液抽取遵循当地伦理委员会方案标准。细胞以5×106/ml的密度，在含10%自体热灭活血清的1640液中，六孔板中贴附1小时。未贴壁细胞收集用以培养CIK细胞。贴壁细胞在2ml/孔的培养基中培养，培养基成分为10%自体热灭活血清、750U/ml粒/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和500U/ml白介素4。
( o: E9 a! ^9 G+ ?$ q2 a& m
# t2 t9 \9 @; P% tCIK细胞培养
1 s( v& i9 S7 n* Q8 q' X0 N0天        ，干扰素γ1000U/ml。
# A; B( {* d1 O# I+ B% m24h孵育后，50ng/ml抗CD3，100U/ml白介素1，300U/ml白介素2。/ L5 X8 O6 G* Y
细胞在37℃、5%二氧化碳环境中培养，每3天以3×106/ml的密度补充新鲜培养基和IL-2。+ U0 X1 w9 p" z4 H: E2 }
完全培养基组分：10%FBS、25mM Hepes、100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素。
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* @6 g5 m) s3 k+ @" k; h  T3 [研究者也在结果中观察到CIK细胞可以以低效应/靶细胞比率杀伤MM细胞，在与致敏DC共培养后可以明显增强这种杀伤效应