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[请教] u6启动子与miRNA超表达 [复制链接]

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楼主
发表于 2011-7-10 22:05 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
36包包
在用含有u6启动子的载体进行miRNA超表达时,应该克隆pre-miRNA序列还是应该克隆将pre-miRNA前后各延伸几十bp的pri-miRNA序列呢?- c4 e* [5 X3 z+ [: T3 k
u6启动子可以驱动转录多大的片段?

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苏眉1989 查看完整内容

一般用miRNA前体,加上其两旁的侧翼序列,然后再加上你所需要的酶切位点,让他走miRNA的自然加工途径就好!只克隆成熟序列,最后出来的不知道会是什么,也许产生的东西根本与miRNA无关。
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沙发
发表于 2011-7-10 22:05 |只看该作者
一般用miRNA前体,加上其两旁的侧翼序列,然后再加上你所需要的酶切位点,让他走miRNA的自然加工途径就好!只克隆成熟序列,最后出来的不知道会是什么,也许产生的东西根本与miRNA无关。
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藤椅
发表于 2011-7-11 09:45 |只看该作者
你转入的受体是什么细胞?
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板凳
发表于 2011-7-11 22:56 |只看该作者
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包装细胞是293t! R) W8 X" r/ I: A. T* O2 K
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报纸
发表于 2011-7-14 21:43 |只看该作者
一般用miRNA前体,加上其两旁的侧翼序列,然后再加上你所需要的酶切位点,让他走miRNA的自然加工途径就好!只克隆成熟序列,最后出来的不知道会是什么,也许产生的东西根本与miRNA无关。
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runsong + 1 + 2 谢谢提供信息

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地板
发表于 2011-7-14 23:42 |只看该作者
回复 苏眉1989 的帖子% Q4 o5 D) y2 }2 c! ?5 u2 [' a
" l% O: Z! a, W1 `" E% n/ |
你们一般用于超表达miRNA的载体是哪个?
! x3 n& F/ l# L" s我用过pEGFP-CI和DsRed-C1载体超表达miRNA,效果还成。
9 q6 l9 V0 V  K  R* U现在想上慢病毒载体,一时间没了主意,不知道选哪个载体好。; L! @2 n( ]: X) g2 S' O1 \/ U
我们这里有pll3.7、pLOX-iresTK系列等载体。
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发表于 2011-7-16 19:04 |只看该作者
回复 runsong 的帖子/ y9 e" n, [# a6 C7 q2 p' Z
2 h: ?2 {& S% I& a) F! x, v7 P+ }; Q
一般是用pcDNA-6.2,但如果要用于包装慢病毒的话我们会连到MCS-EF1载体上,然后再包装入细胞!
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runsong + 1 + 2 谢谢
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发表于 2011-7-23 22:07 |只看该作者
回复 苏眉1989 的帖子
) f% f+ w7 U- Z2 E( j/ C) H: D% o7 `( O; a- m
这篇文章不错

Lentiviral delivery of short hairpin RNAs.PDF

987.12 KB, 下载次数: 31

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