u6启动子与miRNA超表达 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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查看: 54055\|回复: 7	go [请教] u6启动子与miRNA超表达 [复制链接]

runsong

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楼主

发表于 2011-7-10 22:05 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

36包包

在用含有u6启动子的载体进行miRNA超表达时，应该克隆pre-miRNA序列还是应该克隆将pre-miRNA前后各延伸几十bp的pri-miRNA序列呢？ A4 L/ y. {/ @. T; e
u6启动子可以驱动转录多大的片段？

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苏眉1989 查看完整内容

一般用miRNA前体，加上其两旁的侧翼序列，然后再加上你所需要的酶切位点，让他走miRNA的自然加工途径就好！只克隆成熟序列，最后出来的不知道会是什么，也许产生的东西根本与miRNA无关。

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沙发

发表于 2011-7-10 22:05 |只看该作者

一般用miRNA前体，加上其两旁的侧翼序列，然后再加上你所需要的酶切位点，让他走miRNA的自然加工途径就好！只克隆成熟序列，最后出来的不知道会是什么，也许产生的东西根本与miRNA无关。

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icefoxx

新手上路

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藤椅

发表于 2011-7-11 09:45 |只看该作者

你转入的受体是什么细胞?

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runsong

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板凳

发表于 2011-7-11 22:56 |只看该作者

包装细胞是293t

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苏眉1989

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报纸

发表于 2011-7-14 21:43 |只看该作者

一般用miRNA前体，加上其两旁的侧翼序列，然后再加上你所需要的酶切位点，让他走miRNA的自然加工途径就好！只克隆成熟序列，最后出来的不知道会是什么，也许产生的东西根本与miRNA无关。

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runsong

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地板

发表于 2011-7-14 23:42 |只看该作者

回复苏眉1989 的帖子6 [2 t5 J" K. Z% ?9 j, n' G

你们一般用于超表达miRNA的载体是哪个？
我用过pEGFP-CI和DsRed-C1载体超表达miRNA,效果还成。
现在想上慢病毒载体，一时间没了主意，不知道选哪个载体好。
我们这里有pll3.7、pLOX-iresTK系列等载体。