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本帖最后由 zhangmingqi111 于 2011-7-8 09:19 编辑 9 _$ D% q+ B8 P: a U) v$ _& Z
# D# Q$ v' s4 k* d! j2 P' U' ?最近一直在做hMSC培养,通过查阅文献和在坛子里找一些方法,归纳起来MSC培养主要有贴壁和酶消化法。这两种方法我都尝试过,都养出来过,但是重复性很差,所以希望胞友可以帮助解决。下面我分别阐述这两种方法的问题:
3 Z! L" _2 r0 R; W& V# _一、贴壁法:个人感觉优点是细胞状态好,细胞较纯,但是缺点是时间长,不能保证每次都会成功。
" n9 w& F) O# u5 n, z4 q$ u每次在不经心的用贴壁法培养时细胞都会长出来,但是只要用心的,仔细去做,一个月以上的时间细胞也长不出了,真是很奇怪。我用的培养基是10%FBS+DMEM/F12,我每次做的时候是先把脐带中的血迹洗干净,然后剥离2根动脉和一根静脉,羊膜层尝试几次也没扒下来,最后统一放到离心管中剪碎。以前认为可能是剪切的太碎了,所以破坏了细胞导致细胞不生长,最近就直接用大组织块贴壁,细胞也没长出来。通过不断的实验,我发现贴壁时细胞也有方向性,胶质面朝下,细胞可能长出来的机会更多一些。 |
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