免疫荧光二抗的选择求教 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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查看: 101281\|回复: 11	go [请教] 免疫荧光二抗的选择求教 [复制链接]

ivantanqi

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楼主

发表于 2011-6-22 14:46 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本人要做冰冻切片的免疫荧光，以前没做过，希望做到double -lable, 甚至triple- lable,% k! w) m! J0 ?/ r
请问各位高手对二抗的选择有什么推荐，主要用什么光比较好？

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沙发

发表于 2011-6-22 15:22 |只看该作者

加油！

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langziforever

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藤椅

发表于 2011-6-22 16:36 |只看该作者

我也没有冷冻切片，但是我想，目前可以选择的荧光标记还是很多的吧，比如可以用DAPI染核，然后二抗可以标记FITC等荧光基团，只要各个荧光基团的发射和激发光谱不重叠，可以在显微镜下观察就可以的！

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ivantanqi

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板凳

发表于 2011-6-22 19:55 |只看该作者

大家觉得invitrogen 公司的 alexa fluor系列二抗怎么样，有谁用过，比以前的想最普通的FITC好用吗？

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xuetian

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发表于 2011-6-27 15:03 |只看该作者

二抗的选择是随着一抗的，ALEXA FLUOR 挺好用的

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gqs2872022

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地板

发表于 2011-6-27 15:09 |只看该作者

自己根据一抗搭配或者购买对应的荧光双染试剂盒

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zhangyan813

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7楼

发表于 2011-6-28 09:46 |只看该作者

我做过大鼠睾丸的冰冻切片免疫荧光，我觉得冰冻切片的免疫荧光要想做得好，二抗不是最主要的，最主要的是封闭液的选择，这是一个抗原修复的过程。不知道楼主做得是什么组织的，建议你多查文献看看，制定一个好的实验方案。当然了抗体的选择也是很重要的，选择二抗的时候首先一定要看看抗体的波长在不在你们实验室显微镜荧光发射的波长范围之内，其次就是根据一抗选择相应抗体就行，红荧光和绿荧光的选择关键是看波长。我们实验室用的是国产二抗，碧云天的，很好用，我觉得比santa cruz的二抗好用。

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yinjiqingqq

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8楼

发表于 2011-6-29 18:00 |只看该作者

我以前也用过碧云天的，价格便宜，又好用。

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siyue13

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9楼

发表于 2011-6-29 22:21 |只看该作者

本帖最后由 siyue13 于 2011-6-29 22:23 编辑 5 A# m/ C9 c5 ]% E. `2 Q

要做triple- lable最好用ALEXA FLUOR系列的比较好，我以前有个Molecular Probes的二抗选择小册子。找不见了。
最近Life technologies 有一个荧光光谱选择的iPHONE应用，可以帮助挑选荧光产品的，挺简单，楼主应该很适用。9 j& W3 R. k. R% n1 A# H" e; z2 U
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