请教组织块如何很好地贴壁

lyrsea

我们实验室第一次做时，脐带组织没有湿润，再切碎的过程中组织块变得干巴巴的，倒置半小时后，加入培养基，没有漂移，可是过了一个礼拜，没有细胞爬出，大概切的过程，细胞已脱水死了，第二次用消化后的组织块，用盐水冲洗后再次切碎贴壁，倒置2h后，加入少量的培养基，第三天看时有一大半的组织漂浮了。

conanthird

我看实验室人做的时候都在孔板里放一块膜。供参考。

zarecol

根据我个人的经验组织块贴壁好不好主要有两点需要注意，第一，是在剪碎组织块得时候要均匀一些，控制在1mm2左右，另外，在倒置干涸的时候注意协调你组织块湿润程度和干涸时间。仅供参考，希望对你有所帮助。

pheebs

回复 conanthird 的帖子( u& V0 `. B5 Z9 }: e

# h7 s; {. O, i2 o( f6 ~3 B什么膜呢？能具体一点吗

1301918986

组织块在剪切过程中要保持湿润，你说一个星期也没见细胞爬出来，这个倒很正常，因为我们做的脐带组织块要长十几天呢。

death0270

培养基不要加太多，培养基加多了组织块没有办法贴壁，也就没办法爬细胞出来了。我们一个T25的瓶子只加1ML的培养基。
( p, E6 l( p% L* g另外用组织贴壁法的时候，我们不进行倒置干涸的，加入培养基剪碎后直接装进培养瓶中。

chb611301

脐带间充质干细胞组织块法个人觉得和脐带本身的差别有很大关系，有的脐带3天就能有很多爬出来，有的需要一周甚至更长的。在培养过程中我们用15CM的皿，一般加10vml的培养基，第三天补液。脐带当然是剪得越碎越好，第七天把组织倒掉的，都能爬出细胞来的。

大少爷

我们实验室做脐带组织块时，先将其剪成1mm3左右的碎块，然后按重量接种，75cm2培养瓶，每瓶0.5g，加10ml培养基摇匀，静置培养，组织块贴壁效果较好。因为10ml培养基刚好可以覆盖整个瓶底，又不会太多，小组之快会很块贴壁。过几天半量液即可。

conanthird

回复 pheebs 的帖子8 p  F* ~: L# y6 B

% r3 ]- _+ X/ U4 `$ K  E* H( y是Millipore的Isopore圆片膜，PC亲水，孔径及膜的直径可根据需要自己选择。由于虹吸作用，膜可富集细胞培养基的营养成分，避免组织块开始由于重力作用贴到培养板/皿的底部后由于营养缺乏等原因导致的组织坏死。

cactus006

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  Y$ ]' s% U' g: {# e6 d
0 t/ @: A# q( R  Z我用10cm的皿，每个皿只加2--3ml培养基，次日补液，大部分组织能贴壁；但是到现在已经第五天了，还没见有细胞爬出来，不知道哪儿的原因，理论上应该有细胞爬出来才对啊，是不是在分离胶组织的时候，时间太长，脐带组织脱水了呢？希望给予分析，建议，非常感谢！