如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

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" E" K& z5 F* @
谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩3 Q4 H; M4 G# W1 `1 T! I
（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。) d/ E! W# M3 {+ D) H2 N. X
（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。
5 N# K! _4 N7 _（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。
. b. S' ?: i, b" g4 S' h7 y（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插
) @. z$ M9 N$ I) x# o' v) N到滤过液收集管中。
, a, u/ q  S3 `( x# Q3 U( d3 X) h! J（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。0 b. {" ?# e" A# s4 u
（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。: s2 r5 T6 ~0 E7 W
（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。
5 Y* {& e6 o/ ?' y8 Z6 t+ B（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。
5 |0 g6 a& F' l3 ]4 j（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从* l: o0 ]* n/ w" s3 C
样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。. G+ ]. v: ^# Z
（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支9 w  Y2 w' _; p: K
进行病毒生物学滴度测定。
! w% a$ d6 t7 E" p% i  B

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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3 Z& y  l3 t$ ]* e& c. o' m: S# v* Z: X+ P2 k+ t! ?
过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

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5 G) d5 p) |% r& a8 V在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

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2 w9 @4 }& U; w) ~; ~- T1 U: m7 B7 {0 L$ n0 E
国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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$ n+ ]+ s/ S* ^: a
; e: g5 H! V) `0 c& `$ o4 Q这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬