求助：DAPI染骨髓间充质干细胞移植到心肌后冰冻切片问题？？

stefan

    前2周将DAPI染色后的干细胞注射入心脏后，本周取材做冰冻切片，由于是第一次做没有什么经验，向大家请教请教！: ]% ~+ L/ V2 c* X- m, _; C
    这次冰冻切片的目的就是想看看，移植细胞的存活情况。不知道只观察组织里有没有DAPI表达，做冰冻切片后用不用封片，如果封片用什么封片，用甘油还是什么？？还有就是冰冻切片后，切片的保存，直接保存于-20度冰箱就可以吗，能保存多长时间？最后就是，冰冻切片后能否做HE染色，如果能做是和正常的HE染色操作步骤一样吗？还有就是冰冻切片怎么做免疫组化？向各位请较！！

dxb1985

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好像没有人用DAPI做标记吧

大少爷

     甘油封片就可以了。9 \; P7 |; C# \1 y0 g- D/ j* `
       应视不同的组织选择不同的冷冻度。冷冻箱中冷冻度的高低，主要根据不同的组织而定，不能一概而论。如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10- -15℃左右，切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时，可调在-15～20℃左右，切带脂肪的组织时，应调至-25℃左右，切含大量的脂肪时，应调至-30℃。
. S5 R) Z9 Z2 U' e& s% K3 f# ]7 e      冰冻切片的快速染色法：冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。以往，为了防止切片脱落，当切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再固定。根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片，强热作用后，蛋白发生变性，核内含有的物质由于热的作用融合在一起，染色后镜下分辨不出核内的各种物质。冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，核染色质清晰，核仁明显，其他物质都完好保存。 　　方法： 　　① 切片固定30秒－1分钟。 　　② 水洗。 　　③ 染苏木素3－5分钟。 　　④ 分化。 　　⑤ 于碱水中返蓝20秒。 　　⑥ 伊红染色10－20秒。 　　⑦ 脱水，透明，中性树胶封固。 　　冰冻组织1－2分钟，切片1分钟，固定1分钟，染色共五分钟。总共在10分钟内完成快速制片过程，结果与石蜡切片不相上下。 　　冰冻切片的方法还有很多种，如甲醇循环的半导体冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，半导体冰冻切片法和氯乙烷冰冻切片法等，这些方法在目前来说已很少使用。

linchee

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用DAPI标记还是有的