请教心肌细胞的原代培养的注意事项？

shuixiao

最近几天想做一下小鼠或者大鼠心肌细胞的原代培养，请问哪位仁兄之前做过，要注意那些地方，比如用到什么酶，多长时间贴壁，等等？ 小弟之前只做过骨髓间充质干细胞的原代培养……请各位高手指教！

SCNT

首先要说明你是用的胎鼠还是成年鼠，以及你想用组织块法还是消化法等信息之后才有针对性解答

大少爷

呵呵 求教一下 骨髓间充质干细胞的原代培养呗

czzhaozhu

我曾经做过新生大鼠的原代心肌细胞的分离和培养，具体步骤如下：
% \) [" K+ T1 h1 }" W* w1. 取1-3天的新生SD大鼠投入75%的酒精，30秒后取出，眼科剪剪断肋骨，取出心脏，放在PBS中；
: i( X2 I; b3 V% r2. 清洗后，剔除血块，将组织块剪碎，加入0.25%胰酶消化数次后，终止消化，直至组织块完全消化干净；6 h) Q* V  e9 \, T9 @/ w5 p
3. 过筛网后，离心，弃上清，重悬细胞，将细胞悬液分成两部分，一部分差速贴壁小时，另一部分用Percoll密度梯度离心，1500g，30分钟；
  ?7 {) T8 \6 {0 i0 l$ t. q% [! t4. 收集各层细胞，在含血清的H-DMEM中培养。

细胞海洋

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lidaifu001

我曾经做过新生大鼠的原代心肌细胞的分离和培养，具体步骤如下：3 Q+ {# A- l" n' C, X* A9 J9 y8 h  K7 i, U0 k/ ~
1. 取1-3天的新生SD大鼠投入75%的酒精，30秒后取出，眼科剪剪断肋骨，取出心脏，放在PBS中；' V! l  g" V) q
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) V) J+ K  I0 i$ I3 \" f我用的是胶原酶法消化的。