求端粒长度检测方法

ljj0558

我在做端粒长度的检测，有人有好的方法，能说下吗？

tigerfish

我正在做，刚刚买了Roche的TeloTAGGG Telomere length Assay.发现操作极其冗繁，正在准备中
+ l; A% E5 z9 S# H! e" E& U做出来了在和大家讨论。
$ W+ g' ?% M( A$ j! t1 A0 i' b7 u" O' [7 z. g
关于产品可以参见Roche官网。

yunshi503

我 正在做 用 real-time PCR方法

grape

端粒长度的测量方法：
/ ~. a  O# e8 R1、DNA印迹法(Southern blot, SB). [3 R, C7 I* H& ?4 j4 j/ l
2、杂交保护分析法(hybridization protection assay,HPA)0 N  M2 i  `/ N) l+ I% v& L2 E5 N$ J
3、荧光原位杂交(FISH)
+ J  V+ j5 Y9 _; r& s4、流式细胞计量-荧光原位杂交(Flow-FISH)
! \& d. ~8 ?. j; @  {5、寡核苷酸引物原位DNA合成法(PRINS)
/ e0 P9 o$ E. K! u  i6、定量PCR: Y0 K+ D+ T& l0 g& U, I& _
7、单个端粒长度分析(STELA) 等。! ~, O5 O. F: n8 ~: j) L+ E! x

; E: ]( _  O8 }/ M, d总的来说,Southern blot是应用最广泛的方法, 但是针对不同的目的在测量端粒长度时还应有所选择；; j  [) Z2 Q* k% t, b6 T
流式荧光原位杂交(flow fluorescence in situ hy—bridization，Flow—FISH)是近年来发展的检测细胞端粒长度的新方法。该方法与经典的Southern印迹、定量荧光原位杂交比较，所需样品量小、细胞数少，可用于检测不分裂细胞、高通量细胞，操作快捷、灵敏度高、特异性强、重复性好，并且可区分并分析同一份标本中的不同细胞亚群，如不同免疫表型的细胞亚群，而避免预先的细胞分选过程。
5 k1 }3 m- w1 Q& `, j" ]5 H' `/ {: u! i) A1 }5 B# W
具体区别详见文献：: j; r+ o. n6 w* t8 G% R
& O& Z0 Q# o" `

tigerfish

grape 发表于 2011-6-7 16:59 , y3 V- a8 n* f! k* L
端粒长度的测量方法：
% s: b. F! ]& ]! T1、DNA印迹法(Southern blot, SB)  J6 C$ w* l# U
2、杂交保护分析法(hybridization protection as ...

+ x' N7 U/ |6 F) t. {4 k
感谢

ljj0558

回复 grape 的帖子
" f, c* h* ~8 ?" B; }  z3 r
# O6 n0 I2 [# P7 M- p% b2 e  q谢谢啦啊
3 S6 T4 ?1 w4 c. c

shiyi

Telomeres and Telomerase Methods and Protocols 2nd Edi 2011,供参考2 p0 U, }% _. b' y
: Z4 v* k7 `- V4 s" S5 I' s( U

langziforever

其实大家可以关注一下目前高通量测序的方法，国外不是有人发明了一个克隆端粒的载体方法，其实克隆以后可选择的方法会有很多，而目前第三代测序方法可以实现超长度的测序，这样就可以精确的测得端粒的长度，以及重复序列单元，但面临的问题可能是生物信息学组装算法。这方面应该也可以开展一些单分子水平的检测方法！欢迎后续讨论！

feelchen

上完流式之后用什么软件分析结果？转换成长度。

daggercool

我很想下载 我现在也在做这方面的东西