western blot 膜再生液（一抗洗脱液）配方

runsong

做western blot时有时因为蛋白样品少，希望将一抗洗脱掉，再砸其他抗体。
- B+ I1 E5 Q. |4 ~4 k* o望前辈提供配方。
, T9 V% e+ C, u9 H8 f! A4 M0 T注：我们不想买商品化的，以节约经费。

amigel

我们实验室一直用的，放心绝对work

runsong

顶起

amigel

Stripping Buffer:
: b( [! P! j+ w4 U4.925 g Tris-HCl (pH to 6.7 in 200 ml of dH2O)  final = 0.0625 M
7 r, X& l+ u; K3 \3.52 ml ß-mercaptoethanol 9 g. V3 N5 }% S& R2 Q2 R
10 g SDS
& w/ d0 J; s7 y7 d3 H5 GFill to 500 ml with dH2O
, q5 l( Q8 X. q. K4 N. A- J
4 T% z; a1 _" |* k50度水浴保温30min后取出用大量TBST洗，封闭后再用抗体检测

amigel

上面配方中是3.52ml beta-巯基乙醇

runsong

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6 w, U& \6 [( O
+ @( Y# J' W; \2 r+ W8 B2 b- T这是你在网上找的还是你们实验室里验证过的

siyue13

商品化的，才几百块一瓶，不贵的

hcluo

本实验室使用的strips液：4 V8 j1 m& v& \, ^! E
0.5M TRIs HCL (PH 6.8)   6.25ml5 ?* w( A  o- T* i" [' y. i
巯基乙醇                         52ul
% F. l$ a0 z/ e0 V! M1 ]$ A20%sds                           5ml
8 u+ }2 ]: w$ c加水至50ml
7 b, Z/ \0 P1 Q. s

王乾

给你个最简单的，0.8M 的氢氧化钠30秒即可。

runsong

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( T6 U- f+ Q% J6 q5 r& X  J; y" {. I) r( v  X7 n/ S- h
谢谢，那温度有没有要求？