请教甲基化问题

wqcyqy0811

请问在第一篇2006年Yamanaka的经典的iPS细胞文章中，检测多能性基因甲基化时只列出了引物，怎么才能知道它检测的是哪一段序列呢？有哪位做过甲基化，能不能告知如何确定要检测的启动子区域是哪段吗？谢谢

274996064

DNA甲基化是指在甲基转移酶的催化下，DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5－甲基胞嘧啶，这常见于基因的5'-CG-3'序列。大多数脊椎动物基因组DNA都有少量的甲基化胞嘧啶，主要集中在基因5＇端的非编码区，并成簇存在。甲基化位点可随DNA的复制而遗传，因为DNA复制后，甲基化酶可将新合成的未甲基化的位点进行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。* Y2 o* I6 v; i6 y# z# ^6 R
　　DNA甲基化主要形成5－甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的N6-甲基嘌呤（N6-mA）及7－甲基鸟嘌呤（7-mG）/ r8 C1 [# T$ Y+ T9 z

274996064

甲基化PCR使用的引物中未甲基化的C一般转化为U，而DNA中没有U，即为T。下游引物因与序列互补，故而C对应的G变为了A。简言之，上游引物中非CG相连的C应为T，下游引物中非CG相连的C对应的为A。我觉得可以转化后比对一下。引物多，可选择被普遍使用的那一对更好些。我觉得这样你就能找见了

wqcyqy0811

谢谢

ndwzf

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; _9 Z: `: W& u. t# b, i, i巧了！我也有同样的疑问。你现在清楚了吗？能否给我指点一下。

cronos0910

2 b6 B$ _0 d- v; }9 L1 I; B; x5 W" I5 j; ~" ^: g" u# z
他是利用Methylation specific PCR的原理来做分析的，样品经过bisulfite的处理后，没有甲基化的C会转变为U，在PCR扩增过程中就会被复制成T，而甲基化的C则不会有任何变化，经过PCR扩增的放大后依然是C，最后经过定序即可分析DNA的甲基化的情形,而甲基化特异性PCR的引物皆须要使用特定软体来做设计，与一般引物不同