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ada800515 发表于 2011-3-4 22:03 0 ^/ i- I. n4 X' a' |6 e
本人刚开始做ips方面的实验,最近一直在做逆转录病毒的包装,但转染效率很低,每次只有几十个绿色荧光。质粒 ... 1 n& \! c$ I5 X* O7 F3 v
1. 为什么你要同时共转PCL和VSVG的质粒. PCL质粒本身就包括了gag/pol/env三个基因, 也就是说足够包装出Retrovirus了, VSVG我不知道你用的什么质粒,这个一般是用来编码慢病毒的壳蛋白的. 这两个不必一起转. 根据你的实验, 应该只要转pMX和PCL质粒就可以了.
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2. 两种质粒的比例, 可以提高PCL的量, 以1:1的比例转. 每种质粒2ug, 共4ug.& m& j7 F% R- a
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3. 转染试剂. 这个是最重要的. Fugene HD我之前没用过, 但是根据我们的实验, 转染293T细胞, lipo2000要比Fugene 6转染效率高很多. 所以建议你换用Lipo2000转.$ |+ n$ x ?# X6 U+ E9 P
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4. 如果你刚开始包装病毒, 最好用100mm dish包, 六孔板的量有点小, 如果效率不高的话, 产的毒基本没用. |
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