神经干细胞换液问题

cyumin123

     我做的是胎鼠海马的神经干细胞，原代培养了4天，中间加了一下培养液，但是到今天去看的时候发现底部有少数的分化，而且形成的球几乎不多，瓶子底部单个细胞还是有很多，现在要换液了，不知该怎么换，请教一下大家是怎么做的？

xiaodiao123

直接加培养基就可以，如果瓶内培养基过多，可以再分装到两个培养瓶里，如果不吹打的话应该不算传代。

cyumin123

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4 `( \' _9 f* ]' v. Y0 ]; T. b如果分装的话另一个培养瓶的细胞密度不够的啊，你们在做的时候一般密度是多少啊？

xiaodiao123

我们做的细胞是很多的，最起码肉眼下能看到很多细胞。我们一开始不会吹成单个细胞，因为那样生长太慢，当然也不能团块太大，否则细胞营养不足就死掉了。

xiaodiao123

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你要想传代，也可以离心一下，然后然后把上清倒掉，加进新的培养基不就好了

cyumin123

回复 xiaodiao123 的帖子4 i, H! i' ?% L! x' N
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你好，谢谢你的回复。我换液了，不过我做的神经干细胞形成球的很少，不知是什么原因，底部单个的细胞很多，可能做原代的时候杂细胞太多了。

xiaodiao123

神经干细胞形成球需要一段时间，你才做了四天可以再养养看

2008xiao

回复 cyumin123 的帖子" h7 L6 _7 D2 Y
( e9 @) D: y- s  P$ Y
接种前有做台盼蓝染色吗？我也出现这种情况，吹打起来染色后发现没起来的很多是死细胞。肉眼看也能看出个大概，死的要比活的小一倍多，个人看法！

xfyang2007123

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2 w% W' w( F" w! d  m, l你的培养基是怎么配的，成分是什么，都是那家公司的？原代取得是多大胎龄的鼠？再就是时间可能不够！成球慢或不成球有很多可能！

cyumin123

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" Y4 v: F( N; ]; ~2 u( G/ C1 M  C# z6 b: o3 e
你好，我的培养基是DMEN/F12+bFGF+EGF+B27，是Sigma公司的，原代取的胎鼠是14~16天的，时间是可能稍微短了点，不过我觉得细胞在4天左右的时候大部分杂质细胞在这个选择性培养基上应该差不多死亡了呀，底部有很多单个细胞的话形成单个球的数量很少，不知是胰酶消化过头了还是其他原因？