pri-miRNA的超表达能用pEGFP-C1吗？

runsong

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# V" _% `  T/ d# R5 N/ Q
$ y% Z6 K6 b% S; {6 j谢谢你从前的指点，一个多月前我按照你的方法把载体建好了，定量PCR显示34c上调了9倍（以5s为内参，34c与5s的Delta Ct由9.9上调为6.7），现在正在进一步探求34c诱导的效应。  _& c3 A( n: `5 }! v% F; A
不知你们照此法得到的结果如何。6 ~& \" [7 u" \! b6 f" `4 o3 t' T

深海寂寞鱼

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4 U& d: c' P1 ]$ A; i2 _( n3 f7 y$ \0 W# {
恭喜你啊。; r! U6 A2 V8 i" e3 k
不知道你是做的顺转还是稳转？2 W$ E" y. T$ p$ z, A$ B, o+ v; q
我们通常都是做的稳转。不同克隆间的表达水平略有差异。
& ?. Q' Q# P5 B2 V6 G' Q1 }一般都是几倍到十几倍。+ v! d2 @8 R) W$ R2 ^0 |& j
所以好像和你的结果差不多。

sannia

回复 runsong 的帖子' D+ j1 v2 Z# B4 }! U+ o

+ e9 D; f1 c& S# F8 \你好，我最近也要做这方面的载体。
1 y) Y% a$ I8 e8 _不知道楼主能不能共享一下质粒的序列，我看看GFP与primiRNA的之间连接序列

runsong

回复 深海寂寞鱼 的帖子% b( T( u' Q9 o4 m8 K+ D3 S

  K3 L* O9 G$ R/ @我做的是瞬转，转染效率约为60%，转染后3天收样。你们那里还有做稳转的吗。

runsong

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" C) k# F/ V5 Z" D% h
8 a$ c0 y* E+ z! o, o我是按照深海寂寞鱼的方法做的，附件里有全部资料，不清楚的话再联系我。

runsong

附件

sannia

感谢之至！

runsong

我的课题是：miRNA在雄性生殖细胞分化和发育中的作用
! Y. M; V) ]  q以后多交流

runsong

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5 r. w* q" _; b2 ]$ Z2 q以后多交流

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