问一个western blot中很基本又无关紧要的问题 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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查看: 13546\|回复: 9	go [请教] 问一个western blot中很基本又无关紧要的问题 [复制链接]

weiyepan

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楼主

发表于 2010-11-19 07:49 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请问，WB中蛋白转到滤膜上后SDS是否会剥离？( P0 D( g% e, [" I. b8 h+ K3 }4 @
也就是说，蛋白转膜后是否还带有SDS?/ ` G$ G9 k/ F/ [3 w
如果还带，是否会对一抗的结合造成影响？

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沙发

发表于 2010-11-19 09:09 |只看该作者

不会

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bridgeyangfan

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积极份子

藤椅

发表于 2010-11-19 09:25 |只看该作者

转膜后或多或少会带有SDS，但是不会影响结果的，' n: m5 z: T* ]% y/ X0 g" n5 K" Q0 z
封闭时间的把握会影响一抗的结合。

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ghfvcat

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板凳

发表于 2010-11-19 10:04 |只看该作者

很少了，没什么影响

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ghfvcat

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发表于 2010-11-19 10:04 |只看该作者

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ghfvcat

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发表于 2010-11-19 10:04 |只看该作者

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若兰汀

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7楼

发表于 2010-11-19 10:05 |只看该作者

SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。所以，理论上讲SDS只是参与蛋白的解聚过程，而不是与之结合，转膜时蛋白在电场的作用下移至PVDF膜上，即使有SDS粘附于膜上，也不影响蛋白与抗体的结合。