胰酶中加EDTA什么作用？

xiao6tao

请教：胰酶中加EDTA什么作用，必须得加吗？谢谢

sfk06

螯合钙镁离子

王乾

EDTA是一种螯合剂，它可以螯合Ca2 或Mg2 ,而细胞表面很多和培养皿或培养瓶结合的蛋白都是带有Ca2 或Mg2 的，把这些离子螯合后，可以加速细胞和培养皿的脱离，促进消化.EDTA是2价阳离子螯合剂，所以能螯合钙、镁等离子。上皮类细胞的连接存在“桥粒”结构，是细胞间最“牢固”的连接，但桥粒的形成依赖于钙离子的存在。在胰酶消化细胞时，加入EDTA，可以破坏细胞的桥粒结构，使细胞能够分散成单个细胞。通俗地说，就是破坏细胞间的粘连。

english6

应该是胰酶分散细胞，EDTA鳌合金属离子使金属酶失活

yuhaoze

加EDTA传代时候细胞死的多，我一般不喜欢加

xiao6tao

回复 3# 王乾 * a  \$ c6 n( e- Y
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. e' e2 D0 a5 ]1 H0 P    那DMEM可以终止胰酶消化是什么原因呢？

hawkyiger

回复 6# xiao6tao 0 N1 f" [; |9 G% P1 h

7 y1 t1 N( K* f( D2 h* }不是指DMEM可以终止胰酶消化作用，而是通过血清来完成的。我的理解是血清中过量的蛋白可以与胰酶相互作用，通过竞争抑制的作用终止胰酶对细胞连接蛋白等的作用

chb611301

我的理解是胰酶主要是是使细胞和培养皿表面脱离，而EDTA主要是处理细胞与细胞直接的桥联作用，使细胞分散成为单个细胞，尤其对那种细胞贴壁生长依附作用不是很强的，消化时容易成片的掉下来的时候，就加入EDTA分散效果非常好，原来做PC12细胞，就发现加和不加处理效果完全不一样！呵呵

chb611301

还有一点体会呵呵，我在消化细胞的时候，一般都是加入少量的胰酶，轻轻晃动细胞瓶，在细胞表面都挂上胰酶后就将胰酶吸去，根据培养皿的底面积留下0.5~1ml的胰酶，胰酶浓度时0.05的啊，放入培养箱3~5min ,拿出后加入培养基，轻吹3-5次，细胞基本都是单个分散的，也不用在离心收集，直接补充培养基再传入几个培养瓶中培养，省去离心了！呵呵

zhao80410

回复 9# chb611301
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    高手啊