求救：细胞低密度传代第四代不长了

xiao6tao

本人十月中旬将一个百分之八十密度的三代细胞稀释传代，由于没有多少概念，导致传代密度过低十万左右，是用DMEM+10%FBS种在10cm的培养基上，现在过了一个月了，细胞只长到60%左右停止生长了，请高手指点一下！为什么低密度培养细胞会这么容易老化！谢谢！

细胞海洋

建议你上图 更直观

guosapphire

晕，如果你以一个外人的角度看你现在写的东西，肯定一头雾水。

飞翔的十字架

细胞密度过高过低都不行吧 但是到底哪个是合适密度 我也不是很清楚8 A5 j8 ~6 @! X; k
现在仍在摸索中  如一传二或一传三

quit6927

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3 V7 p; W  ]7 k) I* }& \
不会的，MSC低密度应该更好，我们一般用5000个/cm2，1000/cm2也是没有问题的。参考下这篇文章吧。

若兰汀

你怎么确定它老化了呢？首先你及时换液了吗？要保证培养液新鲜，换液前可用PBS轻轻洗一下。其次考虑培养基的PH值是否合适，一般7.2-7.4最适。你可以适当加大FBS的浓度，15%-20%均可。注意细胞状态要是不好，在换液时培养液和PBS在用前最好在培养箱温育一下。一般3-5代的生命力很旺盛的。

xiao6tao

回复 6# 若兰汀
  K! h5 C' M* t3 E( R4 O$ G3 C$ k" `! A* A* F
大概一个星期左右就停止了生长了，中途换过几次液，用PBS冲洗过。培养基用来培养过其他细胞没有此类问题，每次换液时PBS和培养液都37度温育15分钟左右。我现在不确定它已经老化但是可以确定已经停止生长了。我试下加大FBS的浓度吧！

xiao6tao

图片我传了两张，一个4倍，一个40倍的，没有发现老化现象！只是一直没有长了！
8 m5 y/ n: Y* T我想请高手帮我解答：1为什么会出现生长停止，而且大概一周左右，细胞形态正常，培养基正常更换！6 Z" M) U5 c* a
                    2我的细胞出现老化的概率是不是比较大，它为什么会老化，谁有这方面机理的文章！
, b( q4 s9 D" k                     3谢谢！

yuhaoze

细胞不分裂很正常，继续保持换液，不要太勤，颜色变化再换液。元代培养很难，不可能说长就长，你这不长还是好事情，我们实验室的做元代，动不动到了多少代就大片大片地死。告诉你经验：就是千万别放弃，放那个地方说不定哪天那几个细胞就通过G0期了，你就爽了。加点生长因子也可以吧。
+ v$ s% P0 ~2 x  u: N3 F( P  ^+ [你细胞挺正常的，没有老化，元代就这熊样。: m3 f) |  c+ J. e6 U- J
不要放弃，养着就行。. ]  }2 N; x3 o
我个人觉得，细胞从低密度长满平，这样状态会更好。不是密度的原因。

xiao6tao

回复 9# yuhaoze 5 r2 v( f) [9 b# l' z% J
: E* M+ S* D: X( r
* @# T( P+ d9 ~# \/ m+ v+ T' f. I
    呵呵，谢谢！