请教一个双酶切的问题 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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查看: 48722\|回复: 15	go [讨论] 请教一个双酶切的问题 [复制链接]

sidalin301

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楼主

发表于 2010-10-19 10:15 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

2个不同的质粒双酶切再进行连接的时候，如果2个酶切位点内的基因的顺序和启动子方向相反会不会对表达有影响？

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沙发

发表于 2010-10-19 10:51 |只看该作者

会有影响的，但如果一般你两端选择的酶切位点不是同尾酶或单酶切的话应该不会出现你说的情况的。

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ghfvcat

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藤椅

发表于 2010-10-19 10:52 |只看该作者

不太明白，你不能看看连接上之后的顺序对不对么？对就行，不对当然不能表达，跟切之前的顺序有啥关系？

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ghfvcat

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板凳

发表于 2010-10-19 10:53 |只看该作者

不太明白，你不能看看连接上之后的顺序对不对么？对就行，不对当然不能表达，跟切之前的顺序有啥关系？

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ambassador

版主

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报纸

发表于 2010-10-19 10:58 |只看该作者

启动子都相反吗？那看你怎么连接了，能把基因序列上传来看看吗？

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smiling

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地板

发表于 2010-10-19 11:04 |只看该作者

应该有影响。我觉得目的基因反向连接后不能表达出目的蛋白，有可能会表达出无序的没有意义的多肽（如果反向之后的序列上仍然有起始密码子ATG）。启动子应该是原有表达载体上的，不会因为你新加进去目的基因而改变方向。

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sidalin301

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7楼

发表于 2010-10-19 11:14 |只看该作者

先谢谢各位的热心帮助！
目的基因所在的质粒是pUC57，5-3方向的顺序是NheI---目的基因---BamHI，要把目的基因重组到另外一个质粒PNL中，但我没有PNL的结构图谱，只知道它有NheI和BamHI限制位点，如果它5-3方向的顺序是启动子---BamHI---NheI，那这样是不是就接反了？