端粒酶pcr产物的聚丙烯酰胺酶电泳图 如何分析？

kiesheep

下图条带是“从左往右”还是“从上向下”跑出来的？: v/ i1 J2 r  q" I# F/ E# a% j
如图串珠状的条带是怎么形成的？
- p6 N  U3 p5 Q8 L/ V. n
! ]. w4 ]" u( L端粒酶活性检测的基本原理 ：
: s, U: d0 T* P" O% s) r- H9 F利用端粒酶在体外可以以其自身 RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列的特性， 采用PCR方法扩增此重复序列， 并进而用聚丙烯酰胺 （PAGE）凝胶电泳显示 6 个碱基差异的梯带。
$ x( f3 ~" Y% F
8 U: l; N+ T6 C. t* RTRAP assay showing that the cells had high telomerase activity. ! k/ k- N2 r( o( j& R8 z1 M
lane 1, F9 cells (ATCC, positive control); . G2 Q( }4 H4 Y' `
lane 2, FGSCs; * K2 i1 `5 L! d6 _
lane 3, STO (negative control);
' m3 q' ^9 V& c3 U. GM, MRK400 Genescan ROX ladder.
* V% D) T$ c# i" m& O  D, P, S
The data shown are representative of four experiments.
1 I* Y3 n' ?) y7 L. W+ K( e! i0 }& |% I. X% U/ a

& j( J4 C( G7 s. f图片来自文章Production of offspring from a germline stem cell line derived from neonatal ovaries

ambassador

为方便大家查看，把文献上传上来：
: N7 p4 U+ Z/ n( }+ DProduction of offspring from a germline stem cell line derived from neonatal ovaries' G1 K2 T8 |3 h. x( m4 I/ X
( N& Q% {7 y. R! T. |/ R

hawkyiger

从marker的标记来看应该是从上往下跑的。你也说端粒酶是一种逆转录酶，可以在DNA末端添加6bp的重复序列。那么这一活性检测方法自然是基于这一原理了，即在特异性引物末端（非端粒）加上6bp的重复序列，因此它的电泳结果自然是一系列相差6bp的电泳片段了，就如图所示：1和2条带表明细胞有高端粒酶活性，而3为阴性对照则无端粒酶活性，至于串珠只是轻微的拖尾现象。

kiesheep

回复 3# hawkyiger
5 b. y/ `, i7 @. E
* [  X& j% n( \   你看看我这样理解对不对：  \2 J3 A7 ~/ ^4 \7 j. c7 l
  端粒酶活性越强，逆转录的DNA越长。如lane1 & lane2 跑在图片最低端的片段是端粒酶合成过程中的片段，其最长能够合成到如图160nt的产度。
1 E& K8 b& Q- q) |$ T, k; y  如果图片没有拖尾，则将是如下的电泳结果:
, Y% V- [$ P4 D6 {    -      94nt
* k" X$ @6 i' J0 a# g" n    -      88nt! }& [+ e/ o" A  o$ ?2 L/ ]5 t
    -      82nt
3 {' d2 t5 ~* @5 C( k    -      76nt- ]- B: u: ]4 x' O4 L* Q2 ~0 }
    -      70nt5 j; j6 b% ~1 f$ b) h
电泳带 marker

hawkyiger

回复 4# kiesheep ( I9 d2 [. z# [, ?# w7 j
: V& X5 n- g& }& A7 @/ A
我倒觉得条带的强弱是与端粒酶活性正相关的。。。