流式细胞术做细胞周期的pi染色方法（比较全）

aehxing

1）PI单染色法 + v  ^& `7 H3 r& E
方法一 3 |% s3 t7 L- W4 k; Y6 J
1．收集细胞（1～5）×106个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。
: }+ z) U4 g- f! Y2．3ml PBS洗一次。
$ S! R6 ^" R+ b3 K3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。
' p5 v- Z  }9 e( V& E0 }4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。 $ d: H% U) v$ E; j) ?
5．400目的筛网过滤1次，500～1000r/min离心5min，弃去PBS。
& e7 b: c/ i+ F8 `  d6．用1ml PI染液，4℃避光30min。 （PI浓度50ug/mL）
% h1 k9 q: ]( a' J' F$ z7．流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激发光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光，可分析前散射光对侧散射光的散点图及PI荧光的直方图。 ( v5 @: `9 o# H% U7 l
3 L% N# J3 Q' Z$ [4 \  J$ J
方法二 - @7 @5 o1 O. {) O' M! s. y$ L% W
1．收集细胞（1×106个），500～1000r/min离心5min，弃去培养液。 % S* y# a1 H% k' c, z
2．1ml PBS/FCS洗一次。 5 G- E  |0 F5 n4 f3 I  l; t
3．500～1000r/min离心5min去PBS/FCS，加入500μl PBS/FCS和500μl的多聚甲醛固定液，轻轻混匀，在4℃下固定4min。 0 e3 S9 S0 Q# ]
4．500～1000r/min离心5min弃去固定液，室温加入含0.2％ Tween的PBS 1ml，37℃孵育15min。
6 `  \, G0 m7 ~! `% R5．1ml PBS/FCS洗3次，每次5min。 4 J- D6 j3 n5 d- ^: S$ V6 ]
6．400目的筛网过滤1次。 4 w' j! h- F. e8 }
7．500～1000r/min离心5min去PBS/FCS，用1.0ml PI染液，4℃避光至少30min。染色在24h之内皆可行，流式细胞仪分析。

sacia

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michellejo

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