肌源性干细胞 组织消化 几种酶的 量化 比例！请高手指教！

学习快乐

现在本人 正在 提取分离 肌源性干细胞，但几次都是因为消化过度，第二天细胞死亡，以失败告终。
9 d  }9 d2 r  `5 ~2 U请高手指教，胶原酶 dispase 和 胰酶的 具体 建议 毫升数 和比例。

tanhehe1006

胶原酶0.1%就凑效了: \/ d3 ^0 y+ G+ O# e& l' Y
dispase我用的是二型，只要总单位数在2.4U/ml就可以了
4 y) _! x/ @# M- u9 {; C以上两个酶有混加的也有分开的，终浓度掌握好。液体和组织块的比例一般在5-1：1都是有效的2 P4 A9 c3 G/ f* A. N2 `0 P
最后胰酶的消化建议还是轻一些，1：4就好，用PBS稀释

学习快乐

多谢。

学习快乐

做了 几次，细胞经常污染。/ s* w% R* x3 E/ ]  B
最后一次 细胞已经长到 pp5了，又污染了。
/ F0 v& \9 e2 d& d0 e; ]实验室条件是差。
6 m1 Y  `& p9 y4 k9 c7 Z. k# `8 `但感觉是不是 操作 还是 培养基有问题呢？
. a% J& b( s/ W2 b' X% Q& T把培养基 放在培养瓶里面 放培养箱 没有发现污染。5 `/ |+ y9 ]# I' f
各位高手 能不能 给点 你们 成功的 详细 步骤 指导指导啊。

hyde

可能是环境，试剂问题，要相信自己的操作，我在国外交流养myoblast，就照着他们的protocol做的，不太会污染，过程基本类似

lxp10405

终于看到外文版的具体细胞培养步骤了。多谢！

无知后辈

回复 tanhehe1006 的帖子
  f# w+ F2 g3 W: Z- ?* f2 I' p
' \& D& B6 T" W' R, X请问我使用I型胶原酶（0.1%）加上胰酶(0.25%)能否分离出MDSC呢？如果可以消化顺序和各自时间大约多少呢？因为这个dispase实在是太贵了，谢谢

ysfu

太有收获了！

87hgl

回复 tanhehe1006 的帖子
' Z# t- T( w$ ?3 g( p7 l! C4 ?! J9 s5 o- [1 Y
你好，具体问一下胶原酶的型号，我也在养肌源性干细胞，用的是1型胶原酶，1%浓度（这时看到一篇博士论文上说的），是不是浓度有点高，第二天就见到细胞贴壁的。

87hgl

回复 tanhehe1006 的帖子/ j) @! \, G+ E( Y

) U: @9 A( `" o0 Y  h. K说错了，应该是第二天没有见到细胞贴壁的~~~