我做的“ips”，请战友们指点（附图）

hansey

感觉不是很像iPS克隆

liulilin

感觉不是很像iPS.  丝裂霉素百分之一处理3个小时。

liulilin

一般克隆在感染后15、6天出现 然后越长越大。还有就是iPS的细胞是圆圆的  核大大的。

msliyv

你那些貌似的小克隆像是凋亡的细胞。是不是这些小克隆都表达有导入的基因？另外我猜想你用的不是virus transfection导入方法吧？
0 P. s; h& O7 c$ ]  K% o, Z
3 o& i4 k9 M8 W回复 1# 小刀

ambassador

另外，ips是不是如昙花一现般的即将谢掉了啊？
7 T9 s  w% o' k6 W! h) s7 c/ J8 W前辈们请高见！
9 ~% ~* E* u2 V# h) H) {6 T+ ~2 ]小刀 发表于 2010-4-28 22:50

) e& o/ g: N4 y5 c: G+ X1 {: d$ P) c" N

% v! a' A# ^* `7 d% C    有这方面的担心！我给你看看2010.1.27由斯坦福大学Marius wernig 开发的一种新的细胞编程技术——成体细胞到定向功能细胞的直接转化！这不是跳过了iPS这一步么！！！

raymandd

朋友，
) Z+ ]! U. V" \# j0 R6 u# D9 t+ d, {$ b! N/ m. k/ C' k/ v
我只做过病毒转染的yamanaka， 所以只能给你一些有关这个方面的建议。
/ S9 W- S5 n6 @. W病毒制备是最关键的， 你可以浓缩一下病毒，每种病毒病毒原液从30ml浓缩至900ul，每次用100ul/孔(6孔板)，（4种病毒共400ul）， 每孔转染3次。
$ K; F6 ~/ [' V' [' F- G2 `6 }# g
/ Q# p1 T3 l0 G2 Z/ z你应该可以拿到20个克隆。) q. M7 p7 D; m
. x1 p0 T' p1 w$ l' l
祝好运

Jonathan

回复 1# 小刀 6 I$ C3 n9 w" t6 n5 E6 }( R
" B/ L9 f5 f" G' c- a
想问一下LZ，你发的几个图片，一个ips克隆我都没看见。请问你说的“ips”是哪个？
# A# W" H8 O7 r# \& V! S
. K) q; o# d- D- x: G建议一下：加Vc吧。还有VPA，那样你会很快得到ips克隆。& Q  V+ m/ ~- f( P: t/ @7 s' |. G
. C( P- R. V+ }8 |
还有，想说明一下，LZ发帖时，最好说明是人的或是鼠的ips，不然别人难以判断

ambassador

+ G3 ?( z0 t6 x) M5 v& c

有这方面的担心！我给你看看2010.1.27由斯坦福大学Marius wernig 开发的一种新的细胞编程技术—— ...; {' `9 \2 }3 I& p
ambassador 发表于 2010-5-1 17:39

3 l5 l3 w! {0 Y' V+ L) S5 j5 f- {$ e
9 p& e2 _4 K6 @* a/ b/ r* f+ z

$ g( h1 a; R. i5 J% J  p文献已经找到一并分享给大家！
' j+ g9 Q) W& P2 \3 V( O' UDirect conversion of fibroblasts to functional neurons by defined factors
0 `: T  j' Z; ~5 n

上官鑫

请问VC或是VPA的浓度是多少啊？是铺到feeder上再加吗？

iseeyou1210

第一个feeder 太少了,第三个是feeder的长势太好了.
( t$ @& p, _, R1 J$ Y! E  r这些对ES cell的生长都不好,何况ips细胞.