mESC免疫荧光实验最近老是出现问题

mrhighly

如题，IF实验以前没事的。最近细胞爬片上长得很好，我用4% PFA固定后也还好，但是有时通透完，有时封闭完，细胞就全部脱壁了。感觉也不是正常的脱壁，而是细胞都成渣渣了。相同条件通透和封闭，别人的细胞就没事，我的爬片一般封闭完就没有细胞了。ES和MEF细胞做的都这样，有人遇到过这样的问题吗？我的爬片用的NEST的，酒精泡会火上烧一下放到孔里，gelatin或是Fibronectin 37度包被2h以上。求助啊各位。