干细胞培养（新手上路，独自开荒）

鲨鱼也蛀牙

新实验室，建干细胞平台，自己以前养细菌的，老师让养小鼠胚胎干细胞。
: Q7 r: w  Z( |$ F( L我现在用的是：
* q  L' z! e1 @! Y) i* J( R3 E1 NN2B27+LIF 的 Feeder-free 培养基! N8 U3 P5 ~. A8 p9 S1 t  @2 |
E14 细胞系$ s/ t# ^0 M, {" L9 b1 O' s/ q  M
遇到的问题就是, z% a- A. M) L6 m
1.  90% FBS + 10% DMSO 的冻存配方复苏的细胞死的很多，活下来的细胞似乎很容易分化。
4 F) a* t6 D7 g, h' O2. 将在MEF上培养的干细胞adapt到Feeder-free上之后，传代还好，只要进行病毒转染或者药筛，瞬转等操作细胞就会死。# O& l7 _6 S$ |+ x2 n

鲨鱼也蛀牙

没有哪位前辈拉一把吗？求教啊

一颗酸柠檬

我养的是小鼠胚胎干细胞M1的，之前用的冻存方案是 完全培养基：血清：DMSO=5:4.5:0.5   复苏在MEF后，虽然死细胞多，但是传2代之后就长得非常好了，现在传了近10代了6 I# p3 I# S& [3 C8 [# K' Q
不过后来公司给我冻存方案是 完全培养基：血清：DMSO=7:2:1   这个我只冻了，还没有复苏过，所以不知道效果
1 E- S1 w* K( _: o2 N不知道能不能帮到你

huan5050

不知道为什么你要加N2B27,这好像是诱导分化神经细胞的。复苏分化很正常。干细胞不能铺太多，传代要保证吹打成单细胞，细胞之间接触就容易导致分化。