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mominglily

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楼主

发表于 2010-4-7 09:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请教一下各位高手，欲用RT-PCR测定mES细胞的ID50（D3），经过悬滴，悬浮，贴壁诱导培养之后，该如何提取细胞中的基因序列，并加入内标基因来测定RT-PCR呢？

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沙发

发表于 2010-4-7 09:25 |只看该作者

如有可能的话，能否提供相应的文献，目前在往mES向心肌细胞方向分化诱导，主要测向心肌细胞分化的ID50，谢谢各位！

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yuheng

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藤椅

发表于 2010-4-7 09:40 |只看该作者

大体步骤是这样的：
trizol+氯仿+异丙醇提取总RNA（方法trizol试剂说明书上有）
RNA逆转为cDNA,MLV酶说明书上有具体步骤6 Y* \& ?6 s2 j* K" b! ^
cDNA 加入目的基因引物做PCR检测

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ligangcw

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板凳

发表于 2010-4-7 18:57 |只看该作者

trizol，invitrgen的还行，操作也不复杂只是有点贵，而国产的碧云天的试剂也可比较便宜，做RT是做实时定量的还是普通的，两者用一步法试剂盒很方便，但是设计引物很关键

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