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欲用RT-PCR测定mES细胞的ID50(D3)? [复制链接]

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楼主
发表于 2010-4-7 09:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
请教一下各位高手,欲用RT-PCR测定mES细胞的ID50(D3),经过悬滴,悬浮,贴壁诱导培养之后,该如何提取细胞中的基因序列,并加入内标基因来测定RT-PCR呢?
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沙发
发表于 2010-4-7 09:25 |只看该作者
如有可能的话,能否提供相应的文献,目前在往mES向心肌细胞方向分化诱导,主要测向心肌细胞分化的ID50,谢谢各位!

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藤椅
发表于 2010-4-7 09:40 |只看该作者
大体步骤是这样的:
/ L% y; n$ c# u1 [9 E0 C' R, rtrizol+氯仿+异丙醇 提取总RNA(方法trizol试剂说明书上有)
2 \1 c) B% T# D; B$ }1 h/ BRNA逆转为cDNA,MLV酶说明书上有具体步骤6 Y* \& ?6 s2 j* K" b! ^
cDNA 加入目的基因引物做PCR检测
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板凳
发表于 2010-4-7 18:57 |只看该作者
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trizol,invitrgen的还行,操作也不复杂只是有点贵,而国产的碧云天的试剂也可比较便宜,做RT是做实时定量的还是普通的,两者用一步法试剂盒很方便,但是设计引物很关键
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