取小鼠原代MEF消化时间是多少？？？

ouyi2738

我的经验感觉trypsin对MEF的损伤没有你说的那么严重。我们一般是10cmdish做（也有人用15cm的大盘），一个胚胎可以长满一盘。消化时间取决于组织块大小，组织快应该是剪得越小越好，37度消化，2分钟点到一次，组织块小的15min就可以全部消化成絮状。组织块大的我们最长消化过30-40min（0.25trypsin+1mMEDTA），仍然长得不错，我想是组织快大，表面的细胞损伤大死亡较多，但是里面的细胞量也是很多的，总之从未出现过全部死亡的现象。楼主可以试一下连组织块一起培养，有时组织块很多，我们就不过筛网，等贴壁后第一次传代的时候，用差速贴壁除掉组织快和杂细胞。

zhangdagou

楼上说的絮状是什么概念？可以具体描述一下好么？是消化成糊糊状？

zpzp0312

楼主操作有问题$ V# E6 s0 A9 Y3 b" D
即使更长时间的消化，也不会造成细胞全部死亡！
6 N  F- i0 [/ z$ S& e有必要优化一下操作方案

ssuwhite

初涉该领域，先学习下

czzhaozhu

我认为需要的消化时间取决于以下几个因素：1.胰酶的浓度：浓度大消化时间就得缩短；2.消化的温度：37度时时间比室温要短；3.组织块的大小。我们实验室的常规做法是用0.05%trypsin+0.53mMEDTA在37度消化约5-8分钟，每次加约5ml胰酶，组织块剪成1mm3大小就行，大概4-5次就能全部消化完。

ppcl2

这个不像消化时间过长，还是做得少，经验不足，消化即使30分钟也不应该有太大问题的，建议多看两个protocol，取长补短，再试试，这个本来是最简单的细胞分离实验。

ppcl2

你这个是忽悠人家，5分钟是显然不够的，一般15分钟 上下。

zhangdagou

支持楼上的，根据我自己的经验，消化5分钟取得的细胞很少很少

sniper

1分钟多就好

zhangdagou

楼上的或许是无心的忽悠人家，一分钟，你的胰酶浓度多少呢？有这么厉害的？