胚胎干细胞传代后分化怎么办

blue11sea

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各位大侠，我培养一段时间小鼠的胚胎干细胞，遇到的问题就是容易分化，刚复苏时长的不错，传一到两代就开始分化，培养基也是根据文献上推荐的：hDMEM+15%胎牛血清+1%非必须氨基酸+1%谷氨酰胺+1%双抗+1000单位LIF，有时还加50uM的巯基乙醇，但还是分化，不知各位有何高招？？？谢谢

starlight

个人觉得mESC分化主要原因是饲养层状态不好、密度不够以及原来的细胞已经分化；, P7 K6 x6 P) ^) ]% Y+ z3 c
如果细胞已经有些分化但还是想继续传代，我的做法是每次传代，让细胞差速贴壁沉降时间更长点，分化的干细胞会沉下去；

jsy

我觉得FBS其中的不定成分可能也是导致分化的原因，可以考虑采用KOSR；而且细胞接种不宜过密；饲养层需铺满铺匀。

future007

可能是由于你采用的血清批次不一样，所以最好选用成分稳定的KSR，而且用KSR的可以增加传代的代数

future007

补充一下，用KSR的形成克隆的效率可能会比血清低一些。

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inhibitors

ssuwhite

xuexixia

stemness

时间不能太久，最好2d传一次。密度2X10-6/100mm dish.长时间不好可以挑克隆再养。

ppcl2

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你自己做的ES，还是别人给你的，如果是从别人哪里要的已经传了很多代的ES，你拿来培养，就可能很快就分化了，你可以挑好的克隆从新克隆化，如果是用了质量较差的血清，可以换那种已知的适合ES培养的FBS，或买无血清的ES培养基，另外家GSK inhibitors也可以有效抑制分化。Feeder最好用传代3代以内的MEF，feeder的密度，ES的密度也很重要。

sniper

1.看你的ES细胞的情况，如果已经传了很多代最好不要用了；2.feeder太密的话也容易分化；3.丝裂霉素C的量和处理时间要把握一下