ips诱导因子问题？

ahfjwangrui

急求：各位专家，请帮帮小弟忙，我想获取产生ips细胞的转录因子基因，但是设计的引物不知道是应该针对mRNA反转的cDNA，还是针对cDNA中的一段即，CDS段，5 g9 F8 m; t6 h/ a: H# ?
我听人说CDS就可以编码蛋白了，做过这方面的专家们，你们是怎么做的？万分谢谢！

ghfvcat

你要做什么用？一般都是CDS 吧，其它辅助序列表达载体上都有的

baichunyu

你设计引物应该这对cDNA，但是你要确定你所扩的序列准确序列，也就是你要确定出这段基因的目的片段，准确的功能区域

ruanyao57

CDS即可，不要poly（A）。

ahfjwangrui

有做过的人吗？你们出来说个话吧，谢谢

ghfvcat

回复 5# ahfjwangrui
5 u3 x3 D" l; `' o( H
7 S  T* H7 J4 a) D* B
: G! ~8 T6 \8 E8 B, T' j( x    问题是你要做什么用？构建重组病毒，还是做蛋白表达？载体是什么样的，载体上带着什么？

ahfjwangrui

是做蛋白表达的，我的目的要在细胞内表达四种转录因子蛋白

ghfvcat

回复 7# ahfjwangrui
4 E& E$ B- z8 J' K# i& V0 [2 |; }' t" K, }! j) W- g) e
4 n4 Y2 l3 M' f+ _
    是在真核细胞里面么？用的什么载体啊，cDNA包含编码区，先导序列以及后续序列等，一般的这些表达常用的序列在载体上都是有的，只要把CDS插进去就可以表达了6 c6 r2 P9 i# ^. I: y  A
一点浅见，如有不周之处，还望指正

qizhi502

addgene 上有各种因子质粒

ghfvcat

回复 9# qizhi502
4 [9 X8 |9 {. u% [5 v* Y+ _8 L/ A; ]! U( x# P6 q: m

! g0 o4 {- P7 r8 L  J    版主，你买过么？能不能指教一下购买流程？关键是那个进口许可怎么申请？