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293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高,转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。$ Y( J; [, S7 m% u" ^7 X
- D1 }* R' ^3 H" a1 v
5 u1 e# {( S) y9 q$ L, f' x) O+ _" J2 @! S7 f. ^
% I M$ K* B$ W) m* U其生长特性为: 8 o3 i+ d' L4 L2 C/ X; o3 g
粘附- f- M8 [ c7 x7 l I: w
文献评价 293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞。[RF32725]
: O h1 ?8 q- {8 ]" k+ i4 \+ M 表达转染的腺病毒5的基因。[RF32725]" C9 w/ v4 R& s
早期报道认为此细胞含有Ad 5基因组左端和右端[RF32764],现已清楚仅含有左端序列。[RF50113]- Z. J; x; W# Q$ L+ N+ ]
此细胞系人腺病毒滴度高。3 R( L' F( q6 j0 O6 Y1 f
室温不贴壁,37℃几日后重新贴壁。9 d2 Y) c9 r' f0 N4 K1 m9 u
表达由整合素beta-1 亚基与玻基结合素受体 alpha-v 亚基组成的玻基结合素细胞表面受体. [RF33793], T' z7 K; |" n% R6 J, w
The Ad5 insert was cloned and sequenced, and it was determined that a colinear seqment from nts 1 to 4344 is integrated into chromosome 19 (19q13.2).4 ^; X; Q: I$ z9 C6 l- x: Y
传代 293:弃培养基,含0.25% 胰酶, 0.03% EDTA 消化液洗涤,弃去,加1-2ml消化液室温或37℃消化。1 I& \) v7 O. w& K, U" R
加入新鲜培养基,吸出,分到新培养皿中。一传二至一传四。
0 F9 r e1 L @' o3 }% Y0 I 293T:生长快,通常倍增时间不到一天 。每3~4 天1:10至1:20稀释,5% CO2条件下培养。细胞贴壁疏松,可只用EDTA消化,不要用胰蛋白酶过度消化。
' [) v) ]9 k# h7 a6 _; k 培养基更换 每2-3天一次' f2 a( H0 O0 x# ?
冻存液 95%培养基;5%,DMSO;culture medium 95%; DMSO, 5%;
, ~3 H& f6 E# e$ s 培养条件 ATCC培养基:90%的MEM Eagle,加入2mM L-谷氨酰胺,1.5g/L碳酸氢钠,0.1 mM必需氨基酸,1.0 mM 丙酮酸钠;10%加热灭活的马血清
' y: `; W' I) @5 `: V# M* { 37℃培养 |
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