细胞培养问答

细胞卡也

15 冷冻保存细胞之方法？8 u8 \+ [5 R+ j6 v2 I) u0 _$ `" D6 Z# X( B
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4 °C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
# |4 [& v# Y) b3 h5 Y) o. }冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 °C 至–80 °C 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 °C 不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中，惟存活率稍微 降低一些。
; o' o$ m$ X2 x+ O9 |+ h! m16 细胞欲冷冻保存时， 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？) D* z' m! l, Y) i, a
冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial， 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。$ c2 x' Z8 E+ Y+ D) r
17 应如何避免细胞污染？ 细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
) f5 f% H1 ]; E1 w' a0 a18 如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？! c. ^3 ]5 M" w5 B& i9 P" O
直接灭菌后丢弃之。+ q  h- k( Z. j9 s! _) x
19 支原体(mycoplasma) 污染的细胞， 是否能以肉眼观察出异状？% T3 l* O) F8 i- q; R
不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，+ \1 r( l% C1 Y4 a. ~
无法以其外观分辨之。& W) Y9 z9 h) q1 S, R+ Z2 G1 ~3 Y
20 支原体污染会对细胞培养有何影响？  I" \4 m5 I6 q( r0 k
支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数， 代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。

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