细胞培养问答

细胞卡也

1 冷冻管应如何解冻？
8 ?$ W& M& P- t* W7 R取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。/ j9 I/ b7 E' R8 c- |3 c
2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？
; ]; O% i+ U6 b" \& M3 }除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
. Q  O4 D! b3 ]! X# B3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？. m9 M# D! H) [4 c( S8 |
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。
  Q- x2 N3 K7 Y. M4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？& b* U! m  [. s7 }1 V
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
5 o7 {6 ?2 C- y4 g6 [5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?
5 @1 V- S( Y. `. sFBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。
+ Y4 t4 @7 T  b/ x/ k1 `6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？3 }: C5 [0 w4 G4 e
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。
3 l) i8 n0 x1 X/ Y+ O7 O7 何时须更换培养基？  O) U* n; Z8 \
视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。) z9 _( g7 o% D$ T* Y
8 培养基中是否须添加抗生素？
, m7 l. J0 h2 ?( J8 E 除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。4 n3 N- `* k) r# n7 E  J+ @1 U
9 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？9 D* A8 h; w7 U4 x$ X! W: h. R. C
一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于–20 °C，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低， 并可减少污染之机会。

xingyanchao

好雨知春

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1 b5 _) d7 M6 j& M4 p& W4 ^+ D
) b2 c7 R; S8 Z+ z很好 学习了

大胖子阿哥

为了防止冻存管爆裂   我建议先放入-80度冰箱30分钟