间充干流式

花饶然

请教大侠们，最近两个月做了比较多种类的MSC流式表型检测，细胞都是培养过好几代的了，CD105总是不稳定，最低的时候都低于10%，最高的时候也有99%的，是细胞本身的问题？操作都是一致的。另外追问下，各位有没有发现细胞冻存过后，表面抗原会丢失的，我觉得下降一点是正常的，但是有的从强阳变为弱阳就太奇怪了

baby00000003

经验上传代特别频繁的CD105低。
1 B2 H" [' P* ~1 s6 a至于冻存过后，一般没有立刻用来FACS的吧，好歹贴壁个48h再测？' C5 V0 h8 T8 U% D. r0 `( R& C
个人经历：延长孵育时间，比例会高一点～

花饶然

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# \; c0 ~% n! |- k* G! X
+ K6 N9 M# R; s感谢赐教！我们冻存过的有复苏后立即做的，也有培养了再做的，都挺低的。您是说的代次高，还是指传代间隔短 的，我们一直都是差不多的，细胞增殖情况快慢悬殊到也不大
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baby00000003

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0 d$ {7 R8 i- ^3 P9 s. K* o  s; c  s: Z5 F7 g
表用“您”，伦家会不好意思1 p9 G1 q# j6 b/ n
偶说的是传代间隔短，比如3天传一次的可能CD105低，5天传一次的可能好点～
$ M6 G4 t( v: N" Q不过低说的是不足95%哈，90%还是有的～

花饶然

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" V- u7 y3 k9 G7 Z# G8 w. [# w
  M) O& H4 p# d( l; w( d但是我说的低是跌到50%以下了，好奇怪的说，传代间隔我到还真没关注，谢谢交流。。。
/ y5 p  m* c! [$ u/ ?  t“您”是尊称，不表示年龄哈
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wzs1985

你是用什么培养方法？以及用什么冻存试剂？! M! U$ m4 K- O7 {( o+ w: _" \

花饶然

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2 R8 G) J' S. ^$ f' M3 i冻存液就是完全培养基和10%DMSO，几年来都这样

Ivan0108

10%，是不是抗体孵育出现过程中有问题？一般都不会出现这样的啊

花饶然

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& @" g6 H0 l! F+ O; j: n+ E; z' J4 M4 L
& [3 r7 W# ]& K+ i4 o. E木有什么问题呢，我流式虽然做的不多，但这几年都会做一些，应该是木有特殊的. s, ?; J$ [; [1 l0 g- S! H

wzs1985

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0 D; d6 M, B! ^9 q; w
( O2 t9 q) B+ T8 P+ w) s有没有考虑过，现在的血清质量下降了？   你用90%血清加10%DMSO试一试？