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抽取外周血3 ml ,抗凝,血标本用PBS 液2 倍稀释,取3ml(稀释后血液的1/2 体积)的淋巴细胞分离液,加入一个新的离心管。用滴管吸取稀释后的血液样品,沿管壁缓慢铺到淋巴细胞分离液上面,勿打乱液层界面。盖好盖子,用封口膜封好,2000rpm/min 离心30min。离心后管底是红细胞,中间层是分离液,最上层是血浆。血浆层与分离液之间是一薄层较致密的白色雾状层,含单个核细胞(包括淋巴细胞和单核粒细胞)。用吸管小心并直接插入到单个核细胞层并吸取白色雾状层,收集到另一试管中。加10ml 生理盐水稀释分离的淋巴细胞,2500 rpm/min,离心10min,弃上清。重复洗涤1-2 次,除去血小板和抗凝物质,细胞计数,用RPMI1640 培养基调细胞数至2×106 个\ml,移至6 孔板(或细胞培养瓶)中培养(竖立培养)加入10%胎牛血清、1%IL-2(20ul\ml )、1%双抗(青霉素和链霉素),摇匀。5%CO2 培养箱37℃培养。
8 a: F- H1 B a1 q: Y {3 T C# \这是我准备做的试验 最后分离出单个核细胞后通过1640培养 然后加入抗体,流式检测。但是老师说怕分离不出有2×106 个\ml的细胞,无法上流式检测,因为我分出的是原代细胞,一般长不快,/ S$ V4 m9 G, P8 ~9 y2 U& S: P
那我要怎么做才能达到进行流式检测的条件呢? |
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