【讨论】再谈stem cells, side population 和 ABCG2.

细胞海洋

经版主xyzengh授权，转载其在丁香园发布一些文章，很有见地。希望大家积极参与讨论，交换意见。（xyzengh版主最近有点忙，由我代工转贴）3 j! c1 b1 J1 l. g) @# z
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以下正文：1 f# K8 R$ v  w$ f- S
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近来鄙人一篇有关stem cells, side population 和 ABCG2的文章被Stem Cells给接受了，实验过程是意料之中一波三折，可投稿过程却是没想到是出乎意料的顺利，主编和review基本上没有提什么很苛刻的意见，投出去一个月不到就是“provisionally accepted for publication pending satisfactory revisions that appear to be relatively minor”. 后面补上几个图片回过去，2周后就收到正式接收的消息，主编还亲自发了封信过来表示感谢和对我们工作的赞赏（个人认为人家只是礼貌和客气一下，不用太当真，呵呵）。现在上来跟战友们分享一下相关经验以及寻求可能的进一步探讨(我的看法不一定正确，还请高手们多多指教）。0 i' G- ^* ~. V
1.不一定所有的Stem Cell都存在side population （比如人脐血干细胞），而表达ABCG2的不一定都是stem cell的side population (比如人滋养层细胞）；同一物种的不同干细胞（比如人的ESC和HSC）和不同物种的同一类型干细胞（比如人和鼠的ESC和trophoblast stem cells）的SP可能都是不同的，ABCG2可能只是一些细胞的phenotype,它和Hoechst染色不一定适用用于所有Stem cells 的Side population的分选./ p0 Z% l4 Z! ?5 }9 W: F
2.对于不同干细胞（存在SP）的的SP分选，所需要的条件（比如Hoechst温育的时间和浓度）也是不一样的，用于分选造血干细胞的条件不一定能同样用于神经干细胞（打个比方）；, B% U8 T5 }8 Y5 `& q6 b3 Y8 F
3.ABCG2除了大家所熟知bump的功能外，可能还参与像PI3K，MEK/ERK，甚至bFGF/TGFb等信号通路，但究竟具体是一个什么样的过程目前还不是很清楚。
- N5 m1 B* G8 G0 _2 l4 @) i4. 好像有点跟专业无关，纯属个人从课题中的心得体会。当发现了一个有趣的，与众不同的现象时，先别忙着激动，多问一个Why？多想一个So what?!当发现别人（特别是牛人）先报道了一个跟你完全不同的实验结果时，先别急着放弃，也多问一个Why？多想一个reason为自己的data 辩护，努力不一定有回报，但不努力肯定没有回报。与大牛斗争一次的机会不是每个人一生都会碰到的，碰到了怎么办？尊敬他，然后打倒他，呵呵！2 @" {  a. r) n+ {7 I6 |
祝XDJM们好运，在Stem Cells的道路上没有平坦的路可走，但既然选择了这条路，那就争取在沿途上多留下几个中国人的印记吧！

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以下评论为转载) R3 v4 T  ]! B# c! @8 T. y* s
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楼主明鉴，hoechst标记方法并不一样，小鼠标记为90分钟，人，
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+ y3 p; e! e" t" k+ d︶ ︶︶，还有两个物种的细胞标记为2小时，可以找一下Goodell的hoechst染色protocol，但是SP作为干细胞富集方法鄙人认为还是不能轻易放弃。

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另外还有一个物种就是恒河猴，呵呵

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白纸战友说的很对，不同细胞的标记方法并不一样(像有的细胞20min就足够了，所以Goodell的那个protocol并不是放之四海皆准的红宝书，呵呵！另外我个人认为在找到更多abcg2与干细胞直接关系的证据之前，所谓SP分选的金标准还是应该看分选后细胞干性的检测，而不是看它能不能表达abcg2或泵出Hoechst。某些干细胞不表达abdc2,不能泵出hoechst,不代表它就不存在SP， 只是我们还没有找到合适的分选方法而已，不知道白纸战友及各位战友有何其他高见？呵呵！经典被经典传承，经典被经典推翻！SP最开始是在骨髓的造血干中发现的，可最近的一篇Cell Stem Cell却指出它却并不存在于脐血来源的造血干，Why？！呵呵！

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呵呵，这大作两字鄙人实在愧不敢当，园里发CNS的战友都不在少数，何况区区Stem Cells。只是等正式发出来以后还请各位XDJM们多多指教，相互交流，共同探讨！

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呵呵，白纸战友谦虚了，不过有时候先发现一种与众不同的现象，然后接下来去研究其可能的机制，的确是一个很有挑战性的工作，也是一项很有吸引力的工作，科学讲究的是百家争鸣，真理也是在不断争论和探索中慢慢被证实的，干细胞这个领域也一样，虽然从整体而言我国还处于一个相对落后的状态，但在某些方面（比如近来报道的iPSC嵌合体小鼠的成功）我国科学家开始向世界发出自己的声音，希望在不久的将来能够不断听到这样的好消息，呵呵！

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http://www3.interscience.wiley.c ... /122540414/PDFSTART
  [. q$ Z1 ]  I, y; @4 J4 S3 k全文

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呵呵，多谢园子里各位XDJM们的鼓励，园子里面卧虎藏龙，高手云集，我在其中也获益良多，收获颇丰。我发这个帖子的主要目的是抛砖引玉，大家在一起交流一些各自的经验和心得，为后来者提供些有用的信息，让大家尽可能地少走弯路。少些浮躁，少些虚荣，坚持自己的路，坚守自己的信念，在科研这条道路上终归会有所收获的。

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欣赏楼主的工作，但是有个观点不同意“一个不知道机制的现象只是interest to know, but usually means nothing.”看你发现的是什么现象了。

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那是那是，说得的确有道理。不过窃以为现象的发现和机制的解释还是属于不同水平的工作的，呵呵。打个不是很恰当的比喻，现象的发现如果可以发在Stem Cells上的话，那么机制的解释说不定能够上Cell Stem Cell甚至Cell，哈哈！