慢病毒包装

tingwuyu

最近在进行慢病毒包装实验，但是发现一个问题，同样的条件下，前后相隔几天包装出来的慢病毒滴度差异非常的大，后面怀疑是细胞代次的问题，但是细胞从液氮中复苏出来后，在第1-2代的时候病毒量能达到1E8，在第5-6代的时候就只有1E6了，这种差异也太大了吧。我用的是PLP1/PLP2/PLP-VSV-G/pl-GFP的四质粒系统，转染试剂使用PEI，细胞是293T细胞，想问下大家是否是细胞的原因呢？

wuhuaguo88l

确实挺奇怪的，唯一的变量是细胞代数，仔细回忆一下有没有其他的变量影响实验。

wuhuaguo88l

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7 y4 i) j  }$ @以前我们实验室貌似出现过293细胞随着代数增加，细胞状态变差的现象，后来发现是支原体污染，刚开始不明显，后来传几代细胞变差了，才意识到污染，可以考虑这方面因素；还有就是抽提的质粒浓度，内毒素等。

xiaodoudou

回复 tingwuyu 的帖子1 M: G( l2 l" T/ c$ R

1 n0 }4 L- l/ N6 t+ A我也在做相关的实验，能否给个protocol.