第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒

泡沫清风

  C6 b2 L  \5 _+ M0 [# a0 p6 b
8 I! b: c. ?5 A% S% }* w% z铺皿后19小时左右，观察细胞密度：
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$ w7 b# ?# ~$ e% v3 i" v' U' Z' o: m5 ]2 q& X+ _( T! B
实验准备：
2 h7 D7 q3 ]) H& v! e3 p* O) _9 k% C1、培养基：DMEM+10%FBS7 N# _% }4 Q) ?8 R. i2 C9 z
2、lipofectamine 2000 （invitrogen）- W9 C3 f+ ?( b0 O9 ^1 V- C
3、OPTI-MEM （GIBCO）9 h; g; C0 w; J) [
4、质粒; R' \3 C0 x: [- v/ V5 b1 R; q8 e
   两个目的质粒：MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP
) T  s0 T6 x6 i; o! \                        MSCV-IRES-GFP1 {# B1 u' ^% s5 U
    两个包装载体：pKat和pCMV-VSVG6 \/ o: f% u3 b/ s
- p5 C  w5 D- B
实验步骤：; e5 M" ?' Y' N* f; \( u% |: ]
1、弃去6个皿中旧培养基，各加入4ml新鲜培养基。9 z, W& h; a& S; @
2、制备质粒-lipo 2000混合液：
/ A. p- E/ M( [+ l0 m9 f) }（一个10cm皿我用质粒的量是10ug，lipo2000的量是20ul，OPTI-MEM 1ml，6个皿中其中4个皿用来转染MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP，另外两个皿用来转染MSCV-IRES-GFP作为对照）
# k! _' A' W# U0 ?! ]  u8 r$ V% \% f2 ?  }8 {3 F
  （a）取一个4mlEP，加入120ul lipo2000，再加入3ml OPTI-MEM，混匀，室温静止5min。（6个皿的量）
5 @  n- j' s6 p" Q/ [) g  e5 x   （b）取第二个4ml EP，加入MSCV-IRES-GFP 10ug，Kat和VSVG各5ug，加入1ml OPTI-MEM。（2个皿的量）0 a* G6 u; u% K  l/ H. O; Q
  （c）取第三个4ml EP，加入MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP 20ug，Kat和VSVG各10ug，再加入2ml OPTI-MEM。 （4个皿的量）$ L) K  o( \/ w+ }% ~1 c
  （d）取（a）中1ml于（b），其余2ml到（c），混匀，室温静止20min
, B  |. u1 ?; [; f+ o- e3、在1-4皿中加入（a）与（c）的混合液各1ml，5-6皿加入（a）与（b）的混合液各1ml，注意一滴一滴加入。这样每个皿都为5ml总体积。
* D) Y$ N. w/ r4 [4 V6 T* p4、放入温箱培养，到6小时时换液。

轩辕之客

沙发！！！

细胞海洋

图片很清晰，内容很详细，谢谢

mvirus008

see see

john8707

期待啊~

biowx

hualin840518

hualin840518

cortex

xiexie

chenghoby

老师辛苦了