“小二”归来——细胞复苏

泡沫清风

/ _& x# \# I0 {) q" E5 P( Z
$ `+ I0 D! D' S& x) P/ C
不好意思，各位！由于我外出了几天，所以耽搁了！Sry！' ^8 c2 B+ M- `) X: B

# x5 Y, h2 z" I5 G( C6 H: z, g6 \9 _5 D我是上周6早上复苏的细胞，但由于周末出去，所以没有空上网来发帖，因此把这三天的一起发上来啦！; g9 D: f, ^+ s! _- G7 `* `

4 ~$ U1 Y* {  V接下去几天的实验中，如果大家有什么疑问或者建议，请提出来哦！
3 Q) O1 S  w& F% D1 r- s
5 V- r! p/ E  E- a* r. y# G
1 N5 d5 t9 D, `! l3 I' x第一天还是复苏：
7 I& S" Z8 |* o/ e4 x/ k实验准备：
4 j7 W. E2 y" J1 R* Z/ J9 l（1）DMEM：Gibco（高糖）  
5 o+ [- z( K/ U4 R! R) g& E; F" Y) I% M% l（2）FBS：HyClone
& Q$ [) n- p" u/ v- B& X8 x9 \  培养用DMEM+10%FBS
" [  {/ K; i7 |7 L
4 M+ P7 i' }# J+ {& d实验步骤：
( r$ G  x/ Q7 c/ k& ^2 j5 k/ T2 i0 R（1）在15ml离心管中加入5ml常温的培养基（293T细胞怕冷，培养基最好在水浴或常温中放置一段时间）
5 A! m9 h8 u  ^) y" c9 p5 Y（2）37度水浴复苏一支293T细胞
3 E; H! Z* C1 M( S2 l（3）将解冻的细胞液（1ml）转移至5ml培养基中，轻轻吹打数次
! \+ F% S9 [' e" }（4）1000rpm 常温离心5min
; b8 t1 |9 D; i7 y' {4 A（5）在一个T75培养瓶中加入10ml培养基，浸润内壁。6 D' f7 c; i5 k4 N
（由于这支细胞冻的时候是根据T75的量冻的，所以直接复苏到T75瓶中）' z4 k0 d! K3 O- X, K3 w5 g
（6）离心完，弃上清，加入新鲜的培养基5ml重悬，轻轻吹打数次。接种至T75培养瓶中，轻轻摇匀。
. C- X. I& T1 v% S! m4 I（6）放入37度，5%CO2温箱中培养。（培养瓶盖勿拧紧）

hualin840518

顶

sajia

学习

鹤之舞

1# 泡沫清风 6 @3 W  n8 C. j

9 @+ I& i  V) d4 B3 D5 N
  ]( m. s2 Z6 S5 ~3 t- k非常感谢

joicie

支持~~~~~

mmssyyee

冻存的时候一管里有多少细胞啊？加入5ml的培养液会不会有点多啊？

泡沫清风

回复 6# mmssyyee 9 y" M7 D) S4 R% B8 O. g8 H
细胞数3*10^6左右，具体不清楚了。我都是凭感觉冻，不怎么计数。) o; |, t4 X# O. e4 j
一般复苏细胞的时候用3倍以上的培养基复苏

mmssyyee

回复 7# 泡沫清风
8 C, V' h8 ]/ y0 W# ^% P# P$ R: B/ O1 n# [# L; X2 `) c4 r
2 r4 {% i+ y6 G( {( V$ B3 T
    谢谢！

camel_stone

一般我组复苏细胞，会在一分钟内使其完全溶化，所谓慢冻速溶。

dlhhhhh

我来顶顶、、