为什么细胞传代后莫名其妙的不贴壁

fenglinzhu

同事培养的骨髓干细胞，传代之前长得好好的，传代后第二天观察细胞贴壁量少，大量细胞悬浮，而且形态状态不佳。换液后无漂浮细胞，等第二次换液前观察又有大量漂浮细胞，同时贴壁细胞缓慢减少。一开始以为是他消化过头导致细胞活力差，换人操作后还是会出现这样的状况。不知有没有大神遇到过这样的情况，求帮忙！
+ r! z6 h% M0 R3 X" T" F) k* H8 G注：1、培养基清澈，且无菌检测阴性，不像污染。
7 I' a7 o0 t1 F* \( l" o& d       2、胰酶0.05%，消化时长30s-2min，细胞变圆皱缩时终止消化。

qinchuanniu

培养液原因：你用的是是无血清还是有血清培养液，这次是否更换过，如果你的细胞不用于人体内治疗，可适当提高培养液血清浓度；培养皿（瓶）的原因：有些品牌的质量不稳定，会影响细胞贴壁，可以用多聚赖氨酸、白蛋白溶液或适当浓度的血清处理一下。

理科小文艺

1.培养液成分是否有变动？
0 {  \3 P  F& C, c3 }5 o- f" v2.培养箱参数监测是否有问题？3 D" D* u4 R1 [+ y% E+ y
3.是否进行了支原体检测？& J$ Y* a, H) Q; y' }- ~
4.培养瓶确定是贴壁细胞用？

rzghc

建议你测一下支原体。

baby00000003

8 |& l% m* q) S, Z

( c" b9 y( m! n. Y从试剂到设备，整个流程查一遍% X. t& u. b- r# p
比如，配液配方、耗材货号、离心机参数、培养箱参数......0 f* t3 h6 _- H7 ]( D1 m

$ T7 N. }& K8 Y0 t. M如果连续培养几天都有漂浮的细胞，直觉上是培养基配方的问题

fenglinzhu

回复 baby00000003 的帖子: g/ |5 K# ~1 d5 c6 K; C6 G

  U3 ~! [) E* O6 b$ f只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。

fenglinzhu

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! F8 ^8 ^5 \0 ]7 e) R6 T" [4 B% @1 S) x' A" d$ p
只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。如果是支原体污染，那不应该大部分会是这样吗？

fenglinzhu

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* b. U2 X3 ^4 a3 W1 s5 q. d/ C/ {, c9 V" W
只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。培养基也没有变动。

fenglinzhu

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2 S) h9 F7 P/ x" u! J/ q( n# Y% G" g) Q$ {) ]
只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。10%的FBS个人觉得不低了，而且我感觉细胞还是在增长，只是不贴壁了。

baby00000003

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" x6 F; J5 w3 E$ P' f8 e, W那就不好猜了，是不是放在了培养箱里特殊的位置......要不就是不小心被紫外照了之类的....