换液或者传代到第二天的时候培养液出现很多杂质

fenglinzhu

同时培养了不同批次，不同种类的几瓶细胞。都出现一个同样的问题，换液或者传代后到第二天观察会有很多漂浮的杂质。大神们有没有碰到过这样的情况？0 N6 `5 k& Q- f

/ t, M/ ]5 |# G0 r  p4 B( s: L注：1、培养基未出现明显的混浊、变色现象。8 k- q5 P; Z# [; @+ p
       2、其中有一种细胞用未加双抗的培养基培养后污染了，加双抗的没出现明显的污染，只是有很多杂质。" O$ z0 Q  q2 Z* Z6 H9 ^. H4 R; O
       3、所有试剂都用0.22um滤器过滤并做无菌检测合格。, }) l9 A1 N) v) z5 _, `/ h' Q$ n
       4、为了避免操作引起的问题，每个批次每种细胞都有4个人同时同条件培养，均出现上述问题。
# s; h  [3 q% G8 j9 x       5、不管细胞状态好坏都存在上述问题。* W* c' q4 o4 c" `! M

rzghc

支原体检没检过

cxs

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1 R$ I* K- w4 V# W7 }有些问题没描述清楚，不好判断：
: M1 l1 d9 w! q) e* n0 l" g1、你指的“很多杂质”是什么样的，能否描述一下。是不是黑点？均质与否？（就是说大小是不是差不多）仔细观察一下有没有布朗运动？! Y8 L9 d" h) M& e* F
2、换不同批次的细胞这个没啥问题，培养基是否换过？特别是血清。6 o- k  T9 d2 X( J; r9 F% z  p
3、是否确保细胞不是冻存出了问题。如-80冰箱停过电，或液氮为及时补充，导致即使不同批次也有可能状态一样都不好。6 w$ V! d+ Y$ C/ F) {+ D
4、默认为排除你操作问题了，比如消化过度这类的6 i; q( ~$ y# ]$ w- Z
5、另外，支原体个人认为没必要去检，首先，普通光学显微镜是看不到，其次，如果支原体都对你们细胞产生这么大影响，你们实验室基本就废了。待过几个实验室，没一个实验室送检支原体的结果是干净的，只要不影响细胞状态，实验该做做，paper该发发。没了解过国外，在此也想请教一下国外待过的朋友，国外如何对待支原体污染这一块的问题

fenglinzhu

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7 {7 \5 H, L; ], N: z3 O, Y- h/ U. _
有许多小黑点，大部分是均质的，个别有丝状物。由于老板比较抠，血清和培养基都没换，但是每次使用前都会过滤。冻存问题肯定有，但是就算是状态好的细胞里面也会有很多杂质，而且都是隔天后才出现的。另外，用没加双抗的培养基培养的话基本2-3天就严重污染，加双抗的培养基培养就出现很多小黑点，可以洗掉，但隔天又会有。消化的话基本看到细胞开始变圆脱落就终止消化。

阿秀哥

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, ]& |4 S2 V( N6 J2 E
. U4 K3 E6 `$ ?1 `+ I8 \" D( j小黑点？会不会是黑胶虫污染了

liuyunmeng2002

可能是污染了，可以培养培养做做鉴定，试剂也做做微生物培养试试，如是不同批次，不同种类，不同人，只可能从大环境，统一的影响因素去分析，共用的共有的一些因素，如实验室环境，培养基，血清，或操作环境，是否共用的冻存空间等等查查原因。

gondobar

你说的情况很有可能是污染了，不加双抗两天就污染说明污染以及很严重了。

cxs

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. [" Q- p, g- |0 n
/ D0 V4 E# q8 [4 p# @, k& H根据你的描述及自己的经验，我做出如下判断：. j! b( q2 b- o0 c0 T
1、曾经出现过这个问题是因为用了国产血清，可能是细胞营养供应不上，细胞比较脏，出现黑点（不会动），判断是死细胞碎片，并不是污染，换个血清就解决了，据我所知，GIBCO的血清也分等级的。
0 I0 I: z9 V6 M2 t/ C2、出现过几次用进口血清也出现黑点，但是会动，轻度情况下不是很影响细胞生长，重度情况下，无需镜下看也能看到白色细沙状，培养基颜色无变化。可能就是另一位朋友所说的“黑胶虫”，咨询过一个经验丰富的老师，他不认为有黑胶虫这种东西，认为就是未知名原生生物污染。处理结果只能丢弃，再把实验室好好整整。
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  D9 w" K) S& i. v6 p综合以上，建议如下方法排除：1 h% u$ O/ k3 e5 V$ L2 F
设置两个变量——细胞（你自己的和别人养着的没问题的）+培养基（你的培养基和别人用着的没问题的）。如果自己实验室凑不齐以上条件，建议找别的实验室要点。以上两两组合就是4个平行组。如果4组均出现小黑点问题，建议再增加一个变量——培养环境（你们的培养箱和别人用着的没问题的培养箱），当然这是可能性较小的，所以分在附加项。9 A/ F+ w  x7 G; y, q- g
: R; Q+ V9 ^5 R1 B. H% A
以上是我能想到的最完善的方案，想的不充分，可能可以精简，或者还需要增加。抛砖引玉，集思广益。祝好

cxs

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另外，建议上图片会比较直观点哦，这样帮助解答的大家也不至于无的放矢