细胞培养技术中的关键因素－细胞操作从手上功夫练起

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一、准备工作8 X, p8 ^- W- a7 a& U
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准备工作对开展细胞培养异常重要，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试等。
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1、清洁、消毒、液体
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直接接触细胞的用品要超净处理——无非必须分子
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2 x. P1 k4 a$ a% x. m  f4 t6 T9 {' u直接接触细胞的用品要彻底消除微生物+ c" f2 h8 H. L2 k7 [- M9 k' U4 I: W9 i

" u# h5 V6 a5 x- m6 a# ~3 [3 O超净和消毒过的样品要绝对密闭保存，标记消毒时间
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& K* g+ t' ]1 T6 T& B* @! K实验室保持洁净，随时消毒' {& p: u( {- s5 T5 K" m" h
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尽量采用商品化一次性用品# V9 f3 K' T# h5 D

# }, }* P0 @) U; l. C, F% g& q操作者也要清洁和消毒, R1 I6 D5 A0 B& r
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缓冲液要符合生理渗透压（280～310 mOsm）和pH（7.2～ 7.4 ）
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2、玻璃器皿超净6 b! C& r* I/ ~
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去污剂煮沸30min（超声波震荡30min） 温水刷洗 流水冲洗 酸性洗涤液浸泡 流水冲洗 蒸馏水冲洗 纯水漂洗 在洁净温箱中烤干 密封消毒8 T" }" E7 n. a$ ^7 ?

- _9 ^8 W+ i! G! D3、消毒
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干热——玻璃器皿  160℃，120min+ L' |7 x( i5 W7 z% f4 f
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湿热（高压，120 ℃ ）  10~20磅，20~30min/ j0 _9 C! E8 y

- E: T3 r8 J1 ?1 f, k) q1 V紫外线——空气
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消毒剂——场面, t- F) \) U+ j& ?+ P

9 b4 E. F5 {+ l6 B& w3 d微孔过滤——液体  0.22um、0.45um
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二、细胞生长的条件和培养基要求：# U! U6 P" v0 d

' L! ?. p7 K, _. s3 c4 t选择合适的培养基，保证全过程的无菌0 W9 Q5 [/ q# H: c( ^" P2 v" _6 `* k
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细胞的营养需要：氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子、蛋白质、促生长因子。其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供，在很多情况下还需加入10％的胎牛或新生牛血清。. n$ m2 ~' w. c
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培养基的制备：a..浓度要准－渗透压、b. 酸碱度要适宜－酸度计
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, \) |# z# l9 W7 D& P) \% f; M细胞的生存环境：a.. 温度、b.气相、 c.渗透压－－290mmol/L
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三、实验者的操作技术－－细胞操作功夫在手。

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学习

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下面怎么没有了？

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$ r9 K2 f8 F1 g& K恩，总结的不错，其实养细胞主要是要注意无菌操作：3 h4 S6 ^. U9 t- ~1 R7 j
前面好像没有提到泡酸，我感觉这个是比较好的消毒和除垢的好办法。我经常是先冲洗（或超声波）、泡酸过夜、冲洗、高压两遍消毒、消毒前倒少量的蒸馏水进去、消毒后旋紧盖子、近期使用。我想这样就比较彻底。! h6 }1 \, W, H! |9 G  d
我们在无菌操作台上操作的时候最容易被自己的袖口和手套的空挡污染培养皿或者是培养瓶内的细胞。所以要养成良好的习惯，不要把手在培养皿和培养瓶的上方平凡的移动。还有一点就是加样抢的消毒特别重要。我们每回操作前都有用酒精棉球擦一遍的。特别是2株细胞株以上的换液等同时操作的时候，要注意防止交叉污染---最好是一株搞完了在搞另一株（中间消毒）。