- 积分
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- 威望
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- 包包
- 219
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1、在无菌 250ml 离心瓶内加双抗 5ml, 4℃。
9 P& M/ q1 I5 H5 i2、中段尿液 150-500ml, 4℃。
9 A3 j/ F# [5 m/ B4 t& n, L# g3、将尿液分装于 50ml 离心管中,400g 离心 10 min; 弃上清,底部预留约 2-3ml液体; 将上述尿液细胞液体合并为 1 管。
" ?) L, i. U3 O& m4、加入 PBS 至 50ml (双抗, 2x),400 g 离心 10 min , 用 PBS 洗涤 1 次;用 3ml 尿液细胞培养基 (双抗),重悬细胞接种于预先明胶铺被的 6 孔板。 / N+ W/ g( {! B( E" A2 z
5、静置 3 天后观察是否有尿液细胞克隆形成(克隆 3~6 天可形成,也可能超过 6天。克隆形成后 1 周~10 天可长满培养皿,根据细胞状态也可能需要更长时间)。当克 隆形成较多后,每两天更换培养基 1 次;根据实验需要培养、冻存及传代(0.25% 胰酶消化 2~3 分钟,37℃,加入饲养层细胞培养基终止消化)。 % s7 _* `" i0 v' C. z: u: H) v# X
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