干细胞培养污染问题

孤独的吻

大家好，我现在做人脂肪间充质干细胞的分离与培养工作，取脂肪是无菌操作的，然后拿回实验室进行分离纯化，在培养过程中发现有很多“小黑点”，但是培养基不浑浊，细胞生长速度不算快，特别是年龄大些的人，年轻的还好，原代培养要10天，3-4天传代，1：3或4，仔细观察黑点有两种，一是大些的像细胞碎片，另一些在200倍显微镜下看到针尖大小的黑点在动，有人说是支原体污染，哪来的呢？难道是从人脂肪自身带来的？更可恶的是每一例都是一样的。郁闷啊！请教高手！(*^__^*) 嘻嘻……

zpzp0312

虽然自己没有遇到过
1 {7 X$ @( t5 I" U但大家普遍认为这种小东西叫做“黑焦虫”
: L9 Y! f7 v! N) L具体是否为生命体还没有定论
* [/ f& F, Q6 O因为有人说是“硅化物”，有人说是“微生物”9 f3 h* f5 c  _8 r9 N& S
好像这与培养基中血清质量有关。/ x+ S  d5 b7 }3 F7 o
如果遇到了，真是一件令人头痛的事。

have-a-rest

最好把图片传上来看看。
3 d4 Z5 p* a0 {, H; d看到的黑点肯定不是支原体，支原体很小，但不排除支原体污染，可以通过PCR方法检测，有专门的试剂盒。9 U/ A0 }$ B8 u3 h
出现小黑点有多种可能：血清沉淀物，培养基或添加物来源，纯化过程中酶过度处理，细胞代谢产物，脂肪、血细胞或者细胞碎片都有可能。当然细菌污染也要首先考虑。

sailboat

会不会是你培养瓶的瓶盖上的东西啊？
) M3 D' A5 G' X, D+ B- ~  C* t“小黑点”运动侧可能是黑焦虫；
# \( b7 z# _: J9 |0 E) H2 f" _若不运动，估计就可能是其他的原因

cortex

个人认为大的是细胞碎片。正如have a rest所讲，是酶消化过度的原因。在200倍下看到的黑点，因为你每一类都一样，可能是血清里的东西。不妨换一批血清试试。

sailboat

好像清除是比较困难的
. v1 ^: @6 `# }4 b就算是救，也只能救活部分细胞1 [1 B+ b7 l2 Q4 E1 M6 q$ Q
一般黑胶虫存在血清中，空气中、衣服上可能也会有
: c  g( Z4 Q% s( {* |你一开始培养时看到有小黑点吗？

笑可依

也许是死亡的非贴壁细胞，发图片看看才能进一步确定呀，还有细胞生长速度慢，会不会是传得太稀了。如果细胞形态、增殖状态正常，大可不必在意那些黑点。

老杜

对于我来说，这是一个很好的学习机会，谢谢各位

carfan

提问者提供的信息不够详细，不好判断，做干细胞研究最好全部使用进口一次性耗材和专用培养基，的确烧钱，但是和反复不知道问题在哪里而停步或者不幸中途污染相比，只赚不赔。经费不足条件不够，最好挂靠联合做。

uuwang

重新抽一下，应该能滤掉的。