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[请教] 细胞复苏解冻问题  

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金话筒 优秀会员

发表于 2016-11-7 09:34 |显示全部帖子
最近接收了一批寄存细胞,下了液氮后在做复苏。但细胞冻存液融化的时间接近2分钟了,冻存液的量在1.5毫升,水浴锅的温度调到了39度。不知道各位有什么办法能让解冻时间控制在一分钟之内?
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发表于 2016-11-7 10:08 |显示全部帖子
无非就是在水浴里多晃动,如果还是不行,我想主要问题并不在温度,而在于你的冻存量太大了,一分钟比较难全融。我们一般一管也就冻个0.5到1ml的量。
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发表于 2016-11-7 10:10 |显示全部帖子
很简单
9 N# T4 c5 Q# e( c% D+ U. L复苏的时候不断摇晃冻存灌就OK了。! K& c( e% r: V3 ~
你是新手吧
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发表于 2016-11-7 10:30 |显示全部帖子
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使劲晃吧,不过冻存量在1.5min的话很难在1min内溶解
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金话筒 优秀会员

发表于 2016-11-7 10:44 |显示全部帖子
再使劲也没用,估计是量的问题
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金话筒 优秀会员

发表于 2016-11-7 13:59 |显示全部帖子
提高复苏温度吧,尝试下42度,注意一解冻完就要终止。
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发表于 2016-11-7 21:37 |显示全部帖子
其实我个人认为不必完全融化,可以剩豌豆大小时候就从水浴锅里面拿出来,毕竟你从水浴锅拿出来喷上酒精再擦干再用移液枪洗出来到离心管还需要一些时间。
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发表于 2016-11-8 18:26 |显示全部帖子
1.5ml冻存液有点多,全溶解的话花的时间也长,建议加大冻存密度,减少每管冻存液添加量。
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金话筒 优秀会员

发表于 2016-11-9 09:02 |显示全部帖子
可以再提高一点水浴锅的温度,40度,因为你把冻存管放进去,在冻存管周围的水温度会降低,另外在水浴里多晃动一下,冻存的量有点多,1分钟化不完,控制在2分钟-3分钟也是没有问题的,我们试过,不影响,毕竟冻存的体积比较大。还有就是水浴时间久了的话,不必完全化完,还剩豆大的冰碴时就可以拿出来了,等你喷喷酒精,擦拭一下,准备开始实验的时候,就全部化完了,时间刚刚好。
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金话筒 优秀会员

发表于 2016-11-9 14:30 |显示全部帖子
对,一般40度也是么问题的,而且即使一分钟化不完也问题不大,而且下次你可以将细胞密度调整的稍微大一些,
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