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[请教] 细胞胰酶消化完了之后有大片絮状物是怎么回事?   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2016-10-18 16:09 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
养的贴壁细胞,0.25%的胰酶消化后有大片絮状物出现,怎么吹打都散不开,最后只能用100微米的滤膜滤掉,有哪位前辈能给解释一下是什么东西。
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金话筒 优秀会员

沙发
发表于 2016-10-18 16:14 |只看该作者
很可能是死细胞,你台盼蓝染色试试。
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藤椅
发表于 2016-10-18 16:19 |只看该作者
回复 gondobar 的帖子
# ~) U0 ^, @& _7 M3 F6 i/ y5 C: }/ r( }
如果是死细胞,是什么造成这种情况?
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板凳
发表于 2016-10-18 16:54 |只看该作者
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1.细胞汇合率过高,细胞重叠,老化,消化后,细胞成块掉下,形成絮状物。( y1 N6 `. W0 S, T$ W  J
2,如果是成纤维细胞,有可能是细胞分泌的胶原蛋白能力旺盛,絮状物是,胶原蛋白连接的许多细胞。
$ M4 B' H8 ~, \# w3 m/ X$ K' F3,消化过度,大量细胞死亡,释放出的DNA缠绕细胞,形成絮状物。
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金话筒 优秀会员

报纸
发表于 2016-10-18 17:31 |只看该作者
个人认为之所以会出现这种状况可能是由以下几种原因造成的:
1 b0 B5 `, y  T1.过度消化后死细胞释放出来的胶质状的DNA缠绕了细胞碎片形成的,这种很难吹散开。1 |$ ~8 V* j' I, f5 V
2.有可能是细胞间质粘在一起使细胞成团,这样会造成细胞状态下降,细胞就不容易贴壁。
2 R1 @) U: a/ O  w" n8 P" v" g/ T. A3.离心时的速度适当降低一点,防止细胞离心时结团过于紧密,不容易吹散。
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地板
发表于 2016-10-19 13:43 |只看该作者
本帖最后由 免疫与细胞 于 2016-10-19 13:53 编辑 - X# P+ ~; w' t0 r3 [- Z
! l7 P4 r" n  p. I0 X! w; }
如果你感觉消化效果不好,可以调整胰酶种类和浓度,胰酶类型有很多,需要谨慎点选择,对比看看。此外,消化时间可以适当延长,消化时要轻轻摇晃。
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发表于 2016-10-19 15:19 |只看该作者
1.可能是细胞间质粘连在一起,细胞成团造成的
/ U. d( g% L  @+ _2.可能是细胞老化,状态不好,消化后,细胞成团掉下形成的絮状物。9 ^- {! _/ X' _* A+ k1 t
3,消化过度,细胞死亡后释放出DNA缠绕住细胞碎片形成絮状物。
" q$ O$ V( l8 H+ ?6 I5 z( Q建议:消化时间不宜过长,消化过度易造成细胞状态不好,细胞传代次数过多,容易老化,可以冻存之后在复苏试试,此外细胞离心时转速不宜过高,因为离心转速过快,细胞不易吹散,易造成损伤。
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发表于 2016-10-19 22:13 |只看该作者
消化时间不要太长,或者换用更低浓度的胰酶消化细胞。
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发表于 2016-10-20 17:52 |只看该作者
我之前遇到过这种情况,建议消化的时候可以这样操作:加进胰酶之后摇晃一下,使胰酶在细胞上面过一遍,这时你很可能看到有些细胞成片脱落,也就是你看到的絮状物,这个时候可以快速的将这些块状物倾倒到瓶口,随胰酶一起倒掉,可以再向瓶里加入新的胰酶也可以不加,让剩下的胰酶继续消化细胞,这样坚持传代几次看看会不会好转?我分析主要原因是细胞生长状况不均匀,或者细胞活率相差比较大,有些细胞比较活跃有些则比较萎靡,生长不好或者说铁壁疏松的细胞会很快就消化下来,而状态好的细胞则消化时间会比较长。
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发表于 2016-10-26 15:41 |只看该作者
是不是消化时间太长造成细胞死亡了?消化前看看细胞状态怎么样?
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