间充质干细胞原代细胞少

yingfeixiang

最近一直养脐带MSC，采用贴块法培养，但细胞长得不好，150mm培养皿只有2~3块爬出细胞，原代细胞数特别少，请教是什么问题？
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, U6 ^5 k8 a2 u: [% j具体操作：2 G$ g5 P2 z& ?  f" c% B
1、脐带PBS+双抗洗3遍后处理，剥离血管。
$ L/ Z7 P! y) _! a2、洗洗剪碎成2-3mm左右小块。
- j% E2 }) u6 x6 }1 i3、组织块用2ml润湿过夜贴壁，培养皿补液至15ml，三天换液一次。* a( i8 s! K& R
4、培养液：DMEM+10%FBS+双抗。2 G6 ]. h/ O+ s0 i6 n% J

; a' \- `7 ~  E/ p0 e以前也是这么培养的，相当好了，现在原代细胞爬出量特别少，是什么原因呢

随时准备下线

按你的思路来，跟操作、试剂等都没有关系。原代培养多少天？

yaolinzhang

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* h, q6 t, j: a$ \+ e, e! i; `" m0 K* `# C+ s
个人建议：
+ W% G& H, L1 l8 ^1.换脐带试试，MSC存在个体差异；  {5 e' x; O' ]& N8 o& W8 p
2.尽量缩脐带短处理时间；
9 ~1 m0 \" F+ B( z! X! {  a3.优化培养基（尤其FBS，最好选用较好的公司，比如gibico）

yingfeixiang

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) I. J+ Z  ?& Q! O
' t. {' |6 s) E6 S( w( ?$ ~原代14天处理的，计数特别少，不是一份，好几份都这样，就一份细胞养得好，其他原代的都特别少

yingfeixiang

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2 O1 f: e% _8 p9 G- ]1 K- y" ^  O$ e% C% j4 e) h2 ~! N% O: U
做了好几个了，就一个养得好，其他原代都不好，FBS一直是gibico，DMEM是hyclone的。所以郁闷呀

随时准备下线

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不行就试试只要华通胶贴壁，一般这个都比较快。

yingfeixiang

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单独剥离华通胶，这个到是也行。现在就是原代少，传代长的也不行

Llxue

试试间隔久一点换液呢，我们是第四天半换液，第七天才全换液，后面每三天再操作，到目前为止细胞都长势挺好的

2357710447

前面两次全换   5天一次   需要离心    后面半换3天一次   前期不要随时去移动培养瓶    影响胶块贴壁    建议你把培养基的量减少一点   这样贴壁的胶块会增多   爬出细胞的几率也会增加   如果你在第二次全换的时候看到贴壁的胶块还是很少的话   一定要减少培养基   让它赶紧贴壁   否则时间太长长出来的细胞形态很差   希望对你有用

Dunncao

个人的经验觉得有几个问题：
5 C' I# a4 [& ?1、只取华通胶；
7 ^5 Q' E- \% f! X' ]& x2、组织太大，我正常都会剪成糜状；" d  M' T& D9 U3 d1 Z
3、我不太清楚少量培养基过夜是参考的哪里的做法，个人是一次加够；# }5 X1 V& }3 B5 T  }
4、脐带干首次贴壁比较困难的，反复地观察、换液会造成极大的影响。个人操作是静置5天以上再观察，视情况定后续操作。