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细胞培养的过程大概是这样的：失败—成功—体味—收获—思考—交流，你到了哪个阶段？不妨和我们一起来看看丁香园上各位站友养细胞的那些事。
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' t- l, f! x& @- R/ l; N- l 心肌细胞培养体会
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% }# }* V* V. n( D4 x* ]. y# g0 ? 作者：windboy77" Q4 |: I* {, d) D. U
9 m; [$ \6 ~0 _ 记得刚养心肌细胞时候，开始时候很顺利，但有一次突然细胞就不怎么贴壁了，换液时候一吹打，就发现有许多细胞脱落。我检查了培养箱，可是别人的细胞都长的很好，培养基的问题？我仔细观察了一下，培养基粉红透亮，绝对不会污染，血清也没有问题，大家都是公用的血清。& J5 y9 b- n- v) `& B
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当时我很迷惑，后来我向老师如实反映问题，他听完我的叙述后想了想，让我把培养基拿给他看，然后告诉我，你的培养基颜色太深了，肯定偏碱，细胞在偏碱的情况下培养，耐受能力会逐渐下降，可能是产生脱壁现象的原因。4 D3 v" y8 Z3 y" ?& c
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后来我重新测了一下培养基，为 7.5 左右，我用灭菌的 HCL 调了一下，培养基颜色变成淡红透亮。再次培养，发现细胞贴壁比较好了，搏动效果也不错。因此，我以后每次培养前都要重新调好 pH 值，我觉得很多因素是能影响 pH 值的，这也算是实验的一点收获吧。7 n9 Y9 j- Y! \' B0 _
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; Z2 v( q% L& B3 K4 [ 低级错误浪费时间 6 ?+ m4 _; h, o% {) `: g
# Z$ j U o# h4 f7 V0 } 作者：冬日阳光
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在做实验时经常会有一些低级错误的发生，例如，我在做细胞免疫组化时就发生了这样的一个错误：我的细胞是养在 24 孔板里的，细胞固定时我就直接加入了丙酮固定，结果板子里面一片白白的，这时才赶紧询问他人，方知塑料制品会被丙酮所溶，真是好笨。: A; D! _2 {5 l+ q, ?# O4 T
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另有一次，我做细胞爬片时，因为觉得盖玻片不好处理，就自做主张地用了载玻片，那可是我自己花钱去做的小玻片。结果是虽然细胞长在了上面，但是用荧光显微镜观察细胞染色情况时却怎么也看不清楚，换用了盖玻片就好了。结果被实验室主任训了一顿：谁让你自做主张换玻片的？唉，不仅花了钱，浪费了时间，白费了心血，才得出这样的结论。% R1 U0 w' V5 J' O
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昆虫细胞培养体会
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作者：savid888, `" m; c9 `' A# ~& s$ j0 {4 O
: J' l% M6 R. \+ I 鄙人也算养了快一年的昆虫细胞了，而且最近又在做昆虫血液的原代培养，积累了点点经验，说出来大家共勉。9 j- m, x) a. p7 \
0 ?: @" x" w8 F. S 首先，要广泛阅读细胞培养方面的专业书籍，打造自己扎实的专业基础，为以后的操作做准备。这方面的书有很多，《体外培养的原理与技术》，薛庆善主编，科学出版社；《细胞实验指南》，D.L.斯佩克特，etc著，黄培堂等译；《细胞培养》，司徒镇强等。% D( K4 T8 m0 G: b0 z7 y4 C) O
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其次，每种细胞的培养条件都不相同，别人的经验和书本上的 protocal 都只能作为参考，真正重要的是自己培养过程中的不断摸索，这就需要对自己培养过程中细胞出现的状况作详细记录，随时总结。7 o9 ]) P8 h' M8 A
* O6 `3 i% D; M0 K 再次，培养要有极大的耐心，过程中的影响因素又很多，这又是细活，其过程需要考虑各种影响因素，当出现问题时一一加以排除，找到最佳解决方案。我在这里没有讨论细胞培养的细节问题，因为那样的话是说不完的。
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) f Y2 L& b# J, v+ \$ N% P 如何防止细胞污染 : i8 \! R0 z3 F* l, A5 I: P
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作者：tangdl2000" O' M8 ]4 ? Z; o& O! |7 I
* Y. A: T* ^0 U/ b# x( ? 我就怎样防止污染说说我的体会。每个人都担心细胞被污染，每个人都有碰到自己的细胞被污染。起初我学习细胞培养的时候，都是向师哥师姐学习，基本上就是依葫芦画瓢。随着时间的推移，自己也就觉得有些步骤可以省略，有些就要注意。: d; {& S1 ^" C
( [! W5 h# F. C8 a5 w 我个人认为比较重要的几点如下：$ g2 C3 t% w4 C, w" ]2 I
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& Y/ ]5 \; F8 X东西一定要用自己的。既不要借别人的，也不要借给别人。可能大家觉得比较自私。实际上还是很有好处的。并不是每个人的操作都规范，因此相互之间串着用，很容易造成交叉污染。2 ^. w: l/ q2 n h9 m
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o1 d' W3 }" W2 G) [' W9 J我习惯口对口倒液体，在倒前倒后都要在酒精灯上过一下。自己认为比起用吸管吸更能很好的防止污染。步骤越简单，越能防止污染，而且还能节省很多吸管。
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一次将所有的所需要试剂、工具放入工作台。不要做到半路，又出工作间拿东西，这样增加了污染的机会。$ ?( b+ D7 R; t) T0 V0 E( a5 G, k' c7 T
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整个操作要快、动作要轻、而且不要干其他的事情。比如手机响了，最好不要接。我一般操作的时候将手机关了，手机声音响起，好烦躁。9 K- u* i: ]0 G% r
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3 y8 [* `, {) T. w我一般开紫外线照射台的时候，就将培养基、酶、DHANKS 液拿到室外让它自然升温。这样 40 分钟后，温度也升上来了。有很多人将他放到 37 度水浴锅里加热。一定要注意水浴锅的卫生，有的常年不清洗，里面很脏，容易在外面瓶身上吸附大量细菌。因此用它的也一定要勤换水。从水浴锅拿出后，最好找个毛巾插干上面的水。
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) X" l; Z1 Z- E! c0 y& r" }3 _操作前要洗手，用 75% 酒精搽手。
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/ ^! S4 N; k" X0 C9 Y, G k用完操作台，要打扫卫生。
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细胞要经常冻存，我一般只要细胞状态好就将细胞冻存起来。细胞状态差了，扔掉，重新复苏。这是一个必须养成的习惯。毕竟很多情况下，细胞并不是因为污染了，才让你感到头痛。这样你不会担心没有种子了。
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我一般是不加双抗的，只要注意，不会污染。6 S' X3 u9 G! v p! ~# V
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. i8 g, U0 N' t( c+ t; i 纤维细胞培养经验 / w8 S* y8 O3 a7 k0 M8 u
: d1 v6 ^1 [8 e* l1 C" G; H9 B 作者：xiaoyuaizuguo
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2 n0 x3 r2 h7 }6 f 我曾经在自己制作的无细胞真皮上养过成纤维细胞，无细胞真皮是按照文献的方法制作的，把成纤维细胞接种到无细胞真皮上的方法也是按书和文献中的方法。可是很奇怪，成纤维细胞怎么都不长，我重复了好多次，结果都是失败。后来又做了对照，同样的条件，一个平皿中直接接种成纤维细胞，另一个平皿中放入无细胞真皮，再接种成纤维细胞，结果，没有无细胞真皮的平皿中细胞长得很好。
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这样说明不是细胞和平皿的问题，那么问题在哪里呢？我苦思了很久，觉得是不是无细胞真皮在处理的过程中用到了一些化学药品，对细胞的生长有害，可是在接种细胞以前我已经按文献上的方法将无细胞真皮用 DMEM 培养液浸泡了48 小时，在后来的实验中我就将浸泡的时间延长，并在中间每天换浸泡液一次，经过 5 天的浸泡以后，成纤维细胞的接种最终成功了。
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" i, A( q6 |) L K5 _" m 这份迟到的成功提醒我，对于书和文献上的东西，不能不信，也不能全信，很多东西还得靠自己在实验中摸索。
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- ^5 l8 o) d* f 悬浮细胞培养经验
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, n. O9 {5 p: r 作者：liuhl
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1. 无菌操作是一切技术的基础，切记此条。" U3 o! B& |8 a) t2 o- S
/ }! M! o3 I4 }" r. ~ 2.在细胞状态好时，乘胜追击，准备好一切所需要的细胞原料。
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! x6 K, r& [, [ V% J5 N! C# _实验同时需要采用 FCM 检测药物干预后细胞周期的改变，需要做 IHC，Werstern Blot，RT－PCR 等时，可以现将细胞处理好后，根据不同的实验步骤，保存细胞标本，然后各个击破，这样可以减少实验时间。* O: ]. @$ P: J* Q3 H5 o
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如要收集不同浓度点和时间点的标本，细胞处理后，部分用来做流式测周期（固定那步可以放置 -20 度数日，待标本收集全后一起检测）。部分用来细胞涂片（固定后，可以放 -20 度数月，本人曾放置 3 月没影响）。部分用来做 Werstern Blot（将细胞离心呈粉末状置 -80 度保存，或者提取蛋白变性后保存，粉末保存时间可达 2 月）。部分用于提取 RNA 时，可现加上Trizol 混匀后，置 -80 度保存。/ _9 l2 H! D: V# Q( j( D4 Z
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原料准备好后，在根据自己的时间进行合理安排，多出时间查阅文献。1 r4 Q; n- c2 B5 y
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3. 在进行每个实验时，一定要找到该实验的详细的 Protocal，一步一步踏踏实实的完成，一般都会得到比较理想的结果。
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发表于 2016-6-23 20:47
