关于UEA染色的问题

Diane0321

实验需要标记epc，想做个UEA染色，想请教一下各位，是消化成细胞悬液再染色，还是直接染贴壁的细胞呢？这两者各有什么优缺点？染色对细胞的影响大不大？会造成细胞死亡吗？染完之后荧光能持续多久呢？以下是我准备的实验步骤，还请大家批评指正，谢谢！
, Z* r, [9 _' Z5 ^; E(1)        用TrypLE酶消化EPCs；
! P9 F  g: X9 ~8 A9 }(2)        用2ml DPBS将消化后的细胞洗涤一次；7 S6 U. V' W7 t; u0 [' I7 s3 i
(3)        将收集的EPCs悬于UEA染液中（染液浓度为2.5μl/ml）；
* c5 V6 j% _  O4 C& Y/ R/ ~) i: h: h" J(4)        室温下避光染色30min后，用DPBS洗涤两次；8 D9 s# a. Q7 H+ Y4 L( R
(5)        将细胞重悬于培养基中。% g, C( n1 n1 D( }' R  g

honey棉花

想知道你的目的是鉴定不咯？直接染贴壁细胞就可以了
& k6 d5 T- m% S$ L1、体外培养EPCs 至80%融合，弃去培养基，用DPBS 洗涤一次
! y  U1 l- C1 H! L& f( f2、按照1:400 加入UEA-1 染液，37℃孵育20 min （按试剂盒操作说明）* p. \( \7 E) C: s2 Y" m
3、弃去染液并用DPBS洗涤一次后，加入1 ml 4% 多聚甲醛固定液固定15 min 后
- }" x4 I5 S: O# [4、弃去固定液并洗涤一次后，加入1 ml 按1:20000 稀释的DIPA 染液染核3 min，
4 t  F* o) V9 r* H) F0 d5、荧光显微镜下观察拍照。
3 z! V0 U9 {' n, Q3 C在荧光显微镜下可以看到鹅卵石形态的EPC结合UEA-1而成红色，如果不需要染核的话，可以在第2步就进行观察了* C: [, q6 I, g
希望对你有帮助

Diane0321

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! q1 \; O# l  F5 u$ [/ G2 t, J5 o( u/ W
嗯嗯，非常感谢你的帮助