小鼠胚胎干细胞培养几天后贴壁不牢换液容易飘走怎么办？

anning111

当然，LIF必不可少的- }4 W& X& k- W, G; d1 F

天龙八部

谢谢各位的帮助！！                
" Q$ ?: t# Z  n" E8 |             50ml体系* ^! W0 W+ _0 W" J& L0 e% z
DMEM                                23.5ml/ ^: s, ]4 P# o; A+ {
Knock DMEM                        23.5ml2 |$ W; |* x; ~1 n
NEAA                               500ul$ }$ d5 m. |$ D* B4 D7 r
GlutaMAX                               500ul* L; E/ x3 W1 {2 V& p, {% s) r. T
N2  (1x)                              500ul3 o5 T) {) j8 `5 e$ F: ?  C* w
B27   (1x)                             1000ul
7 y+ Q/ y4 U. e- I( f) g9 @( {/ AChir99021   (10mM)                 15ul( ^3 U, n' m' l" Y: ]$ a
PD0325901   (10mM)        5ul
5 J* L/ R, F0 m8 e( s! o4 D0 c0 Vβ-Me                                     0.415ul, Q4 L4 f6 K# B8 e6 ?5 }% {
DIS                                      500ul
+ m# f2 I4 a0 ^! b9 R: X' XLIF                                      5ul
2 r: q4 c0 g0 i$ ?& L, w& `这是我在明胶上培养时用的培养基。# v- r6 `7 k8 X4 @
另外我用的0.1%的明胶，是不是浓度有点低？7 R% I$ b7 U! C" N

天龙八部

我明胶包板至少30min，看@anning111的方法5min就够呀~看来我的明胶浓度有点低。

细胞海洋

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3 X, Y4 G: L& E& T- x+ G3 M6 A1 k7 g; J
0 }0 i7 n- [' j! A; Y你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
! q9 D* C8 `3 m- T& q: G) @
7 ^# C$ s2 Y5 W& ^否则他会看不到

zhx1912

回复 splinkerette 的帖子
; m) Q2 @8 F" Q
1 V' @- l: u0 E  ^你好，前辈！
; X2 o- @! i' b3 }  x9 f" H9 m7 b& _4 s2 \  }9 S; }
我接下来也要养ES细胞，还是个新手，现在在制定培养方案，还希望能得到你的帮助
  V3 i. I+ L) s1 |3 u( b( s' h) Q! Y. y
我用的MEF饲养层培养ES细胞，现在对于LIF的用量还不能确定，想问下你们是怎么确定LIF的？

splinkerette

回复 天龙八部 的帖子
- C! |, i( e8 w- }
/ \% Q8 e6 U9 x, ^很多文章中用的都是0.1%的明胶，不用担心这个浓度问题

splinkerette

回复 zhx1912 的帖子! _1 B2 ?- u2 j9 x: Y, j

+ `8 z- r; k# Q# x' z8 n# |我们不管有没有饲养层细胞，用的都是终浓度1000U/ml的LIF

zhx1912

回复 splinkerette 的帖子
. C/ U! O# B" F. k0 y! e0 H( b7 a0 E
OK！谢谢！

gxg2002cn

我也遇到过这个情况，培养基明胶浓度都一样，把胰酶换成Accutase就好了。传代的时候别消化过了。

gxg2002cn

我也遇到过这个情况，培养基明胶浓度都一样，把胰酶换成Accutase就好了。传代的时候别消化过了。